間隙連接蛋白Cx26和Cx43在移行細(xì)胞癌中的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、細(xì)胞間隙連接(gapjunction,GJ)是位于相鄰細(xì)胞間的膜通道結(jié)構(gòu),由細(xì)胞膜上的連接子(connexon)相互銜接而成。連接子含有6個(gè)相同的啞鈴形蛋白亞單位,每個(gè)亞單位即細(xì)胞間隙連接蛋白(connexin,Cx)。相鄰細(xì)胞間通過間隙連接所介導(dǎo)的細(xì)胞間隙連接通訊(gapjunctionintercellularcommunication,GJIC)進(jìn)行著信息和能量的交換,參與細(xì)胞間物質(zhì)交換的代謝偶聯(lián)和電信號(hào)傳導(dǎo)的電偶聯(lián),對(duì)細(xì)胞的新陳

2、代謝、增殖、分化以及內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等生理過程起著重要的調(diào)控作用。腫瘤是一種增殖失控和分化紊亂、嚴(yán)重威脅人類健康和生命的一類疾病,而起源于尿路上皮移行細(xì)胞的惡性腫瘤是泌尿外科最常見的腫瘤之一。間隙連接蛋白異常表達(dá)所導(dǎo)致的細(xì)胞間物質(zhì)和信息交流功能的缺陷與多種腫瘤的惡性增殖和轉(zhuǎn)化密切相關(guān),而且與藥敏基因抗癌產(chǎn)生的旁觀者效應(yīng)有關(guān),GJIC與旁觀者效應(yīng)的關(guān)系已得到充分證實(shí),已成為當(dāng)今腫瘤學(xué)研究的新熱點(diǎn)、新動(dòng)向。作為GJIC基本結(jié)構(gòu)單位的Cx是一個(gè)多

3、基因、發(fā)育上保守的大家族,在各種組織的表達(dá)既有一定的組織特異性,又呈交叉現(xiàn)象。Cx26、Cx43在正常乳腺、膀胱等組織中均具有表達(dá),其異常表達(dá)可能與包括膀胱癌在內(nèi)的多種尿路上皮癌的發(fā)生有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)擬研究間隙連接蛋白Cx26和Cx43在正常尿路上皮中的表達(dá)及其與尿路上皮移行細(xì)胞癌生物學(xué)行為的關(guān)系,探討移行細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)理;期望為移行細(xì)胞癌的早期診斷提供新的指標(biāo),為開辟其藥物治療新途徑提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果總結(jié)如下:

4、 1.HE染色篩選標(biāo)本:(1)、確定正常組織標(biāo)本無增生、化生、癌變等病理改變;(2)、結(jié)合臨床資料根據(jù)WHO及UICC標(biāo)準(zhǔn)對(duì)腫瘤組織分別進(jìn)行分級(jí)和分期。 2.通過免疫組化SABC法分別觀察正常尿路上皮以及移行細(xì)胞癌中Cx26、Cx43的表達(dá)情況。每批染色均設(shè)立以PBS代替一抗、二抗的陰性對(duì)照,高表達(dá)Cx26的正常乳腺組織作陽(yáng)性對(duì)照。發(fā)現(xiàn)Cx26高表達(dá)于所有正常尿路上皮(膀胱、輸尿管、腎盂),主要定位于移行細(xì)胞膜上,分布較為均勻

5、,在移行細(xì)胞癌中表達(dá)明顯減低或無表達(dá)。Cx43在正常尿路上皮中表達(dá)多變,陽(yáng)性強(qiáng)弱程度不一,主要分布于胞質(zhì)及胞膜上,有的固有層呈陽(yáng)性,少數(shù)標(biāo)本未見表達(dá)。移行細(xì)胞癌中Cx43陽(yáng)性表達(dá)顯著降低。 3.運(yùn)用LeicaQwin計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)Cx26、Cx43在正常尿路上皮及移行細(xì)胞癌中的表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè)。圖像測(cè)量包括陽(yáng)性顯色的相對(duì)面積(%)和顯色的強(qiáng)度(用灰度值表示)。發(fā)現(xiàn)Cx26在正常尿路上皮中平均陽(yáng)性相對(duì)面積為45.83±2

6、.98,平均灰度值為111.78±4.16,在移行細(xì)胞癌中平均陽(yáng)性相對(duì)面積降低為18.58±16.41,平均灰度值增加為148.32±22.92,并且隨著移行細(xì)胞癌惡性程度的增高,陽(yáng)性面積逐漸下降、灰度值逐漸增大。Cx43在正常尿路上皮中平均陽(yáng)性相對(duì)面積為31.02±11.89,平均灰度值為132.22±17.65,在移行細(xì)胞癌中平均陽(yáng)性相對(duì)面積降低為9.59±8.58,平均灰度值增加為165.79±13.85。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

7、:采用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間率的比較采用x2檢驗(yàn),病理圖像分析所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用最小顯著差異法(LSD),相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)。以P<0.05為顯著差異,P<0.01為非常顯著差異,P>0.05為相差不顯著。Cx26在移行細(xì)胞癌中的表達(dá)與正常尿路上皮相比,無論是定性還是定量都有顯著性差異(P<0.05),隨著移行細(xì)胞癌(TCC)惡性程度的增

8、加表達(dá)逐漸減弱(P<0.05),在膀胱癌、輸尿管癌、腎盂癌之間表達(dá)沒有顯著差異(P>0.05),即與腫瘤發(fā)生部位無關(guān),Cx26表達(dá)與腫瘤分期也無明顯相關(guān)性(P>0.05)。Cx43在正常尿路上皮中雖也有表達(dá),但表達(dá)強(qiáng)弱不等、缺乏特異性,在TCCⅠ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)之間Cx43的表達(dá)沒有顯著差異(P>0.05)。結(jié)論:間隙連接家族成員中,Cx26而并非Cx43是尿路移行上皮中具有相對(duì)組織特異性表達(dá)的基因,對(duì)維持正常尿路上皮細(xì)胞物質(zhì)和信息的傳遞等起

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