調控性RNAi系統構建及靶向誘導腫瘤干細胞凋亡對抗腫瘤免疫機制影響研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學碩士學位論文調控性RNAi系統構建及靶向誘導腫瘤干細胞凋亡對抗腫瘤免疫機制影響研究姓名：劉淑鵬申請學位級別：碩士專業(yè)：遺傳學指導教師：孫樹漢20100501第二軍醫(yī)大學碩士學位論文RNA干擾(RNAi)是一種通過特定寡核苷酸序列靶向降解細胞中互補mRNA，進而抑制基因在體內和體外的表達的技術?，F在廣泛應用的質粒或病毒載體表達siRNA的方法，無法控制基因表達的空間及時間的特異性。這導致了各種調控表達系統的構建，應用最廣泛的是

2、Tet調控表達系統?；谝陨匣A，我們進行了以下研究：第一部分，改建tet調控表達系統。根據購自Clontech公司的Tcton調控表達系統，在pTetOnAdvancedVector、pTREtightvector、pEGFPN1(AgeI位點突變缺失1及pLKOIpuro質粒的基礎上構建單一質粒的四環(huán)素調控表達質粒pEGFPTctonTREsh。利用此質粒進行了后續(xù)的靶基因Oct4的RNAi干擾實驗，并篩選了穩(wěn)定轉染細胞株。提高了體

3、內實驗過程中RNAi的干擾效率。第二部分在實驗室前期工作的基礎上，檢測RNAi技術靶向Oct4誘導腫瘤干細胞凋亡后，免疫狀態(tài)的改變。在試驗中我們發(fā)現，利用RNAi技術干擾Oct4表達致使腫瘤干細胞數目減少后，腫瘤微環(huán)境中IL4，ILl0和TGF13減少。為了進一步確認這是否導致腫瘤微環(huán)境中腫瘤免疫反應增強，利用流式技術檢測腫瘤浸潤DC、CD4T及CDST細胞情況。發(fā)現腫瘤干細胞減少后，腫瘤浸潤的DC中matureDC的比例增加，CD4C