PTH對(duì)大鼠成骨細(xì)胞OCIL基因表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、目的：探討甲狀旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)對(duì)大鼠UMR106成骨細(xì)胞中破骨細(xì)胞抑制性凝集素(osteoclast inhibitory lectin，OCIL)mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　 方法一：體外培養(yǎng)大鼠UMR106成骨細(xì)胞，用不同濃度的PTH(1-34)處理細(xì)胞24h或用10nM的PTH(1-34)分別處理細(xì)胞2-12h，在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞，提取總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用實(shí)

2、時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)OCIL mRNA的表達(dá)，觀察PTH對(duì)UMR106成骨細(xì)胞OCIL mRNA表達(dá)的時(shí)間效應(yīng)和劑量依賴關(guān)系；二：分別用不同信號(hào)通路的激動(dòng)劑或阻斷劑單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用PTH，作用于UMR106細(xì)胞不同時(shí)間，在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞，提取總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)OCIL mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、PTH(1-34)調(diào)節(jié)RANKL/OPG基因表達(dá)早于對(duì)OCIL的調(diào)節(jié)；

3、其次，PTH(1-34)對(duì)OCIL mRNA的表達(dá)的調(diào)節(jié)既存在時(shí)間效應(yīng)關(guān)系：6h后開始上調(diào)OCIL mRNA的表達(dá)，24h作用達(dá)高峰，約為對(duì)照組的2.8倍(P<0.01)；又存在劑量依賴關(guān)系，當(dāng)PTH(1-34)濃度為10nM時(shí)，對(duì)OCIL mRNA的表達(dá)的誘導(dǎo)作用達(dá)到最大。
　　 2、PKA通路激動(dòng)劑FSK、db-cAMP在作用時(shí)間內(nèi)(4h-24h)均能夠上調(diào)OCILmRNA的表達(dá)，并且最大效應(yīng)值與對(duì)照組比較，分別約為對(duì)照組的

4、4.2倍、4.5倍，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；PKA通路阻斷劑KT5720和H89對(duì)OCILmRNA的基礎(chǔ)表達(dá)均無影響，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；但KT5720能夠部分阻斷PTH(1-34)誘導(dǎo)的OCILmRNA的表達(dá)，抑制率達(dá)到50％左右，與PTH(1-34)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；H89也能夠部分阻斷db-cAMP誘導(dǎo)的OCILmRNA的表達(dá)。
　　 3、PKC通路激動(dòng)劑PMA對(duì)

5、OCILmRNA的表達(dá)隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)多種變化趨勢(shì)：6h抑制作用達(dá)到50％，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；12h抑制作用消失，24h逆轉(zhuǎn)為輕度上調(diào)，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；PKC通路阻斷劑chelerythrine(CHN)能夠上調(diào)OCILmRNA的基礎(chǔ)表達(dá)和PTH(1-34)誘導(dǎo)的表達(dá)，但后者與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 4、鈣離子載體A23187能夠長(zhǎng)時(shí)間持

6、續(xù)上調(diào)OCILmRNA的表達(dá)，6h達(dá)最大值，約為對(duì)照組的5.1倍，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；鈣調(diào)蛋白拮抗劑W7和CaMKⅡ(鈣調(diào)蛋白激酶Ⅱ)抑制劑KN-62分別抑制PTH(1-34)誘導(dǎo)的OCILmRNA的表達(dá)達(dá)到50％以上，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 5、MAPK通路阻斷劑PD98059對(duì)OCIL mRNA的基礎(chǔ)表達(dá)無影響，但能阻斷PTH(1-34)誘導(dǎo)的OCILmRNA的表達(dá)，抑制

7、率達(dá)到50％左右，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 6、PD98059能夠抑制FSK和db-cAMP對(duì)OCIL mRNA表達(dá)的誘導(dǎo)作用，但對(duì)鈣離子載體A23187誘導(dǎo)的OCIL mRNA表達(dá)無影響。
　　 結(jié)論：
　　 1、PTH(1-34)上調(diào)大鼠成骨細(xì)胞中OCIL mRNA的表達(dá)，并且這種調(diào)節(jié)作用存在明顯的劑量依賴和時(shí)間效應(yīng)關(guān)系，PTH在劑量為10nM、作用于細(xì)胞12h后對(duì)OCIL mRNA表