雞甲狀旁腺激素基因真核表達質粒構建及其表達效果研究.pdf

1、甲狀旁腺激素(PTH)是脊椎動物體內調節(jié)鈣、磷代謝平衡的主要激素之一,由甲狀旁腺的主細胞產(chǎn)生,其主要的靶器官是骨骼、小腸和腎臟.該研究利用基因重組技術,取45周齡的產(chǎn)蛋新?lián)P州雞甲狀旁腺組織,提取RNA后通過RT-PCR方法成功的擴增出雞甲狀旁腺激素基因cDNA,通過TA克隆將擴增所得cDNA片斷插入載體pGEM-T內,通過測序分析得出新?lián)P州雞甲狀旁腺cDNA堿基序列與GenBank上已經(jīng)發(fā)表的序列比較有100％的同源性.蛋雞蛋殼品質問題

2、和肉雞腿病問題正日益對家禽生產(chǎn)構成嚴重危害.為了尋找一種廉價而有效的解決方法,我們考慮到了選擇基因治療方法.為此我們將擴增所得的雞甲狀旁腺激素基因cDNA片段,通過基因重組技術將其插入真核表達載體pCDNA3和pCEP4中,分別構建pCDNA3-PTH和pCEP4-PTH真核表達構件.將所得的兩個表達構件通過轉化DH5α細菌,然后通過篩選、鑒定得重組子,將重組子擴培后提質粒,將提取的質粒純化后注射入實驗動物雞體內,每次每只實驗雞腿部注射

3、400ug,每個真核表達構件注射3只產(chǎn)蛋揚州鵝,另有3只產(chǎn)蛋雞作對照,對照組注射400ul5％的葡萄糖溶液.每次注射前空腹采血5ml,每隔2周注射一次質粒,共清高射質粒2次,采血4次,所采血樣均放置-70℃低溫冰箱保存,取樣結束后一次性分析.試驗結果:(1)將通過RT-PCR所得的cDNA片段克隆到載體PGEM-T中后測序,所得結果與GenBank中發(fā)表的序列對比,發(fā)現(xiàn)有100％的同源性.(2)將構建好的真核表達構件pCDNA3-PTH