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文檔簡介
1、背景和目的: 目前認為,動脈粥樣硬化(AS)是一種慢性炎癥過程。內皮細胞損傷和單核細胞與內皮細胞黏附是AS發(fā)生的重要始動環(huán)節(jié)。細胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecLlle-1,ICAM-1)和血管細胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molectlle-1, VCAM-1)是存在于內皮細胞表面的一種重要的黏附分子,主要介導單核細胞與內皮細胞黏附,從而引發(fā)動脈粥樣硬
2、化。血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)是腎素-血管緊張素系統的重要活性物質,研究表明AngⅡ可刺激內皮細胞ICAM-1和VCAM-1的表達,在AS的發(fā)生中起關鍵作用。血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]是腎素-血管緊張素系統的新成員,具有降低血壓、抗增生、利鈉利尿等拮抗AngⅡ的作用。但Ang-(1-7)能否對抗AngⅡ刺激內皮細胞表達粘附分子的作用,國內外未見相關文獻報道。本實驗通過體外培養(yǎng)的臍靜脈內皮細胞,采用ELISA法和半定量RT
3、-PCR法從蛋白和mRNA水平檢測ICAM1-和VCAM-1的表達,觀察Ang-(1-7)對AngⅡ誘導的臍靜脈內皮細胞黏附分子的影響。闡明Ang-(1-7)對AngⅡ在炎癥方面的拮抗作用,揭示Ang-(1-7)拮抗AngⅡ作用的另一新途徑,為臨床心血管疾病的防治提供理論依據。 方法: 1、臍靜脈內皮細胞培養(yǎng)鑒定。 2、試驗分組 (1)對照組培養(yǎng)液不加干擾因素;(2)Ang Ⅱ組加入Ang Ⅱ 100nmol/L
4、;(3)Ang-(1-7)組力口入Ang-(1-7)1000nmol/L;(4)Ang Ⅱ+Ang-(1-7)組分別用Ang-(1-7)10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L預處理30min后,再力口入Ang Ⅱ 100nmol/L;(5)Ang Ⅱ+Ang-(1-7)+A-779組先用1000nmol/L A-779預處理30min后,再用終濃度為1000nmol/L Ang-(1-7)預處
5、理30min,最后加入終濃度1 00nmol/L Ang Ⅱ。 3、各組用ELISA法和半定量RT-PCR法從蛋白和mRNA水平檢測ICAM-1和VCAM-1的表達情況。 結果: 1、正常細胞生長良好,呈鵝卵石樣鑲嵌排列,細胞透明度大,輪廓不清。熒光免疫組化染色法,可檢測到培養(yǎng)的HUVEC的VⅢ因子相關抗原為陽性。 2、與對照組比,AngⅡ(100lamol/L)使ICAM-1和VCAM-1的分泌量明顯增
6、加,ICAM-1和VCAM-1 mRNA的表達顯著升高(P<0.05):Ang-(1-7)(1000nmol/L)使ICAM-1和VCAM-1的分泌量降低,ICAM-1和VCAM-1 mRNA表達亦降低(P<0.05); 3、混合刺激組中,與Ang Ⅱ組比較,Ang-(1-7) (10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000 nmol/L)呈劑量依賴性的抑制Ang Ⅱ刺激ICAM-1、VCAM-1的分泌
7、和ICAM-1、VCAM-1 mRNA的表達(P<0.05),Ang-(1-7)濃度為1000nmol/L時,雖然蛋白和mRNA表達仍高于對照組,但無統計學意義(P>0.05); 4、加入A-779后,Ang-(1-7)的作用消失。 結論: 1、AngⅡ可使內皮細胞ICAM-1和VCAM-1的分泌量明顯增加。 2、Ang-(1-7)可使內皮細胞ICAM-1和VCAM-1的分泌量減低。 3、Ang-
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