VEGF shRNA表達質粒抑制血管內皮細胞VEGF表達及角膜新生血管的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討RNA干擾對血管內皮細胞(ECs)中VEGF表達及大鼠堿燒傷后角膜新生血管(CNV)是否具有抑制作用。 方法:用DNA重組技術設計合成針對VEGF mRNA的3條shRNA寡核苷酸片段,構建真核表達質粒VEGF shRNA1、VEGF shRNA2和VEGF shRNA3,然后將質粒通過脂質體介導分別轉染ECs,RT-PCR和Western blot分別檢測ECs中VEGF mRNA和蛋白表達及干擾效率,并篩選出干擾效

2、率最高的質粒(VEGF shRNA3質粒)進行體內實驗。建立大鼠堿燒傷后CNV模型,實驗組于結膜下注射VEGF shRNA3質粒后,顯微鏡下觀察CNV生長情況,7天后利用RT-PCR及Western blot分別檢測角膜組織VEGF mRNA和蛋白的表達。 結果:經(jīng)酶切及測序證實重組質粒構建成功。VEGF shRNA1、VEGF shRNA2和VEGF shRNA3質粒均可下調ECs中VEGF mRNA和蛋白的表達,其中VEGF

3、 shRNA3質粒的抑制作用較強,VEGF mRNA和蛋白的抑制率分別為68.92%和66.22%。VEGF shRNA3質粒轉染細胞后48h和72h的VEGF mRNA和蛋白抑制率均較24h高,48h和72h間差異無統(tǒng)計學意義。體內實驗中實驗組CNV面積明顯減少,VEGF mRNA和蛋白在角膜組織中的表達明顯降低,抑制率分別為41.84%和41.86%。 結論:構建的VEGF shRNA質粒能有效抑制ECs中VEGF mRNA和

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