VEGF對低糖性腦微血管內(nèi)皮細胞損傷的作用研究.pdf

1、低血糖是糖尿病患者采用胰島素強化治療時常見而嚴重的并發(fā)癥。臨床研究表明，低血糖誘發(fā)的腦水腫是低血糖性腦損傷的始動過程。腦微血管內(nèi)皮細胞是血腦屏障重要組成成分，位于相鄰內(nèi)皮細胞間的緊密連接通過限制小分子物質(zhì)通過進而維持腦組織內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。但是，低血糖是否通過破壞緊密連接來影響腦微血管內(nèi)皮細胞功能引起腦水腫的發(fā)生迄今還沒有被研究。血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF），作為調(diào)節(jié)血管

2、功能的一個潛在因子，在腦缺血中具有保護作用已經(jīng)被證實，并且還能促進神經(jīng)元的存活及突觸的生長。這些報道促使我們研究VEGF對低血糖性腦內(nèi)皮細胞功能是否具有保護作用。
　　我們采用永生化的小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞作為研究對象，體外模擬血腦屏障。首先，研究低糖條件對腦微血管內(nèi)皮細胞的影響。通過采用熒光素鈉（Na-F）檢測暴露于低糖條件的跨內(nèi)皮細胞的通透性；Western blot和細胞免疫熒光（IF）檢測緊密連接相關(guān)蛋白claudin-5，

3、ZO-1和occludin的表達變化和分布改變；乳酸脫氫酶實驗（LDH實驗）檢測低糖對內(nèi)皮細胞的毒性作用。結(jié)果顯示，與正常葡萄糖組相比，低糖條件組（0、0.5、1 mM）的跨內(nèi)皮細胞通透性均明顯升高，同時，緊密連接蛋白claudin-5的表達也相應(yīng)下降。當較長時間（24 h）較低糖濃度（0、0.5 mM）時，腦內(nèi)皮細胞毒性增加。
　　進而，我們采用ELISA檢測低糖條件下24 h后培養(yǎng)基中的VEGF的分泌量，發(fā)現(xiàn)低糖條件組中分泌的

4、VEGF含量比正常葡萄糖條件組中高。最后，通過外加VEGF研究低糖條件下VEGF對腦內(nèi)皮細胞是否有保護作用，我們檢測了低糖和VEGF共存條件下跨內(nèi)皮細胞通透性、緊密連接相關(guān)蛋白以及細胞毒性的變化。另外，我們還檢測了轉(zhuǎn)運葡萄糖的主要蛋白Glut-1和反映細胞凋亡程度的主要指標Bcl-2的表達變化。實驗結(jié)果顯示，與低糖組相比，低糖和VEGF共存條件下跨內(nèi)皮細胞通透性降低、claudin-5表達相應(yīng)增加以及內(nèi)皮細胞的毒性顯著下降。另外，Glu