TFF1和TFF3在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩118頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、結(jié)直腸癌是消化道系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,我國大腸癌發(fā)病率位于惡性腫瘤的第三位,死亡率位于惡性腫瘤死亡率的第五位,在歐美等西方國家占惡性腫瘤死因的第二位。近幾十年來,隨著人民生活水平的提高及飲食結(jié)構(gòu)的變化,大腸癌的發(fā)病率、死亡率逐年增高,且有年輕化趨勢。根治性治療后異時性轉(zhuǎn)移,特別是肝轉(zhuǎn)移是預后不良的主要原因。約35%結(jié)直腸癌確診即伴有肝轉(zhuǎn)移,同時性肝轉(zhuǎn)移率為15-25%,異時性肝轉(zhuǎn)移率40-50%。尸檢甚至高達60%~70%。篩選高?;?/p>

2、者及有效的腫瘤標記物是改善預后的重要環(huán)節(jié)。
  三葉因子(trefoil factor TFF)家族具有一個或多個三葉因子結(jié)構(gòu)域的多肽小分子,主要由消化道黏液分泌上皮細胞合成和分泌,在粘膜損傷修復過程中起主要作用。TFF家族有三個成員:TFF1(乳腺癌相關(guān)肽,pS2)、TFF2(解痙多肽,SP)和TFF3(腸三葉因子,ITF)。TFF在整個消化系統(tǒng)中均有表達分布,胃腸道是TFF的主要合成場所。TFF1和TFF2在胃部,TFF3則主

3、要在大腸和小腸呈高表達。近年來TFF家族與腫瘤發(fā)生,侵襲及臨床預后等方面的相關(guān)性廣受關(guān)注。近來研究表明TFF1在乳腺癌、胰腺癌、肺癌、膀胱癌等許多腫瘤和轉(zhuǎn)移灶中表達,與腫瘤細胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移和腫瘤血管生成有關(guān),因而被認為是一種癌基因。研究者還認為T FF3有抑制細胞粘附,促進癌細胞侵襲,阻斷細胞凋亡的作用,其高表達提示胃癌預后差。TFF1和TFF3作為檢測乳腺癌細胞播散的標志物。TFF1和TFF3表達與乳腺癌、胃癌等發(fā)病,進展和預后之

4、間的關(guān)系研究較多。但它們與結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展及臨床預后等之間相關(guān)性的報道寥寥無幾。
  Twist1基因是一種在胚胎發(fā)育過程中起關(guān)鍵調(diào)控作用的轉(zhuǎn)錄因子,是一種高度保守的堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basichelix-loop-helix,bHLH)蛋白家族的重要成員。近期研究證實,Twist基因廣泛地參與了調(diào)控器官的生長發(fā)育、腫瘤發(fā)生、細胞增殖分化等過程。Twist基因也具有癌基因的特性,能夠編碼凋亡抑制蛋白,影響腫瘤細胞的凋亡,抑制細

5、胞分化、誘導上皮-間質(zhì)變(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的發(fā)生、參與腫瘤的耐藥以及腫瘤血管的生成過程從而在腫瘤發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要的作用。研究顯示TFF3的抗炎癥特性可能通過對Twist的調(diào)節(jié),因為TFF3可以持續(xù)上調(diào)Twist蛋白表達。
  所以我們圍繞:
 ?。?)TFF1,TFF3和Twist1能否在結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中起作用,是否與臨床病理因素及預后相關(guān)。
 

6、 (2)TFF1和TFF3促癌的作用是否與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān)等兩個問題展開我們的研究。
  第一部分:TFF1、TFF3和Twist1蛋白在不同轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌組織中的表達
  目的:檢測TFF1、TFF3和Twist1在不同轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌組織中的表達情況,了解其差異表達及其與結(jié)直腸癌臨床病理特征及預后的關(guān)系。
  方法:采用免疫組織化學方法(SP法)檢測TFF1、TFF3和Twist1蛋白在75例結(jié)直腸癌、47例癌旁正

7、常組織、30例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及10例肝轉(zhuǎn)移灶中的表達。收集符合條件的臨床病例的臨床資料,進行分析。
  結(jié)果:TFF1和TFF3主要表達在細胞漿,胞膜亦有部分表達,而Twist1在胞漿和胞核均有表達。TFF1、TFF3和Twist在結(jié)直腸癌中表達率分別為66.7%(50/75),78.7%(59/75)和54.7%(41/75),而在癌旁正常組織中表達率為27.3%(13/47),100%(47/47)和17%(8/47)。與原發(fā)灶相

8、比,TFF3和Twist1在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和肝轉(zhuǎn)移灶中的表達無統(tǒng)計學差異(P=0.879,P=0.105 for TFF3 andP=0.08,P=0.780 for Twist1),而TFF1在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)和原發(fā)灶之間表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。雖無統(tǒng)計學差異,TFF1及TFF3隨轉(zhuǎn)移而表達有增強趨勢。TFF3和Twist1高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期和不良預后相關(guān)(P<0.05)。TFF1高表達只與分化程度相關(guān)(P<0.05),

9、而與預后無相關(guān)性(P>0.05)。TFF1和TFF3表達水平之間關(guān)系有統(tǒng)計學意義,并兩者呈負相關(guān)關(guān)系(P=0.014 r=-0.291)。
  結(jié)論:TFF1、TFF3和Twist1在結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中表達有明顯差異,原發(fā)灶和不同轉(zhuǎn)移灶之間亦有表達差異,但此差異達不到統(tǒng)計學意義。TFF3和Twist1高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期和不良預后相關(guān),可作為判斷預后指標。
  第二部分:TFF1、TFF3和Twist1基因在不

10、同轉(zhuǎn)移潛能結(jié)腸癌細胞系中表達的研究
  目的:檢測TFF1、TFF3和Twist1 mRNA和蛋白在不同轉(zhuǎn)移潛能結(jié)腸癌細胞系中表達情況,以了解三種基因表達與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
  方法:RT-PCR和Western-blot檢測TFF1、TFF3和Twist1 mRNA和蛋白在轉(zhuǎn)移能力不同的人結(jié)腸癌細胞系(HT-29,SW620,LOVO)中的表達情況,以了解有無差異表達。用HIEC(永生化人類腸粘膜上皮細胞系)作對照。<

11、br>  結(jié)果:
  1. TFF1、TFF3和Twist1 mRNA在不同轉(zhuǎn)移潛能結(jié)腸癌細胞系中表達QRT-PCR結(jié)果顯示:HIEC、HT29、SW620、LOVO四種細胞株中的TFF1 mRNA相對表達量分別為0.595±0.257、3.257±1.424、2.275±0.372和0。除LOVO細胞系外,其余結(jié)腸癌細胞系中TFF1表達均較正常腸上皮細胞高(P<0.05),且隨細胞株轉(zhuǎn)移潛能的逐漸增強,TFF1表達量逐漸降低(P

12、<0.05)。TFF3 mRNA相對表達量分別為0、0.0329±0.0181、1.339±0.2168和0??梢奣FF3 mRNA正常腸上皮細胞系中不表達,而結(jié)腸癌細胞系中表達增高(除LOVO細胞系),且高轉(zhuǎn)移細胞系SW620中表達量較低轉(zhuǎn)移潛能細胞系HT29明顯高(P<0.05)。Twist1 mRNA相對表達量分別0.233±0.093、0.485±0.0535、1.547±0.379和3.410±0.493??梢娬Dc上皮細胞系

13、中表達低,而結(jié)腸癌細胞系中表達量均增高(P<0.05),且隨結(jié)腸癌細胞系轉(zhuǎn)移潛能的增強,Twist1 mRNA表達量逐漸升高(P<0.05)。在高轉(zhuǎn)移LOVO細胞中的Twist1 mRNA表達量顯著高于其它兩株,組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在轉(zhuǎn)移能力較低的SW620細胞及HT29細胞中的表達均較低,兩組間差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
  2.TFF1、TFF3和Twist1蛋白在轉(zhuǎn)移能力不同的結(jié)腸癌細胞系中表達We

14、stern-blot結(jié)果顯示:HIEC、HT29、SW620、LOVO四種細胞株中的TFF1蛋白的表達量分別為1371±114.7、26074±1413、8076±1171和343.61±91.47。除LOVO細胞系外,TFF1蛋白在結(jié)腸癌細胞系中表達量較正常腸上皮細胞系高(P<0.05),結(jié)腸癌細胞系中表達量隨著轉(zhuǎn)移潛能的增強而逐漸降低(P<0.05)。TFF3蛋白的表達量分別為48.22±10.60、365.6±83.51、929.

15、20±92.95和45.69±7.11。TFF3蛋白在正常腸上皮中不表達,而結(jié)腸癌細胞系中表達量升高(除LOVO細胞系外)。隨著結(jié)腸癌細胞系轉(zhuǎn)移潛能的增強,表達量亦逐漸增高(P<0.05)(除LOVO細胞系外)。Twist1蛋白的表達量分別為1706±198.4、3859±166.9、3524±192.2和7831±222.2。Twist1蛋白在結(jié)腸癌細胞系中表達量較正常腸上皮細胞系高(P<0.05)。隨著轉(zhuǎn)移潛能的增強,Twist1表

16、達量逐漸增高,高轉(zhuǎn)移細胞系LOVO中表達量最高。
  結(jié)論:隨著結(jié)腸癌細胞系轉(zhuǎn)移潛能的升高,TFF1表達量逐漸下降,而TFF3和Twist1表達量呈逐漸上升趨勢,表明TFF3和Twist1起促進轉(zhuǎn)移,而TFF1在結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移中可能起保護作用。
  第三部分:TFF1、TFF3基因表達與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系
  目的:觀察 TFF1和TFF3以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)目標基因(Twist1,snail,E-cadherin,vim

17、entin,β-catenin)在不同轉(zhuǎn)移潛能結(jié)腸癌細胞系中的表達趨勢,初步判斷 TFF1和TFF3是否與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)。
  方法:應(yīng)用實時定量 RT-PCR和Western-blot檢測 HIEC、HT29、SW620、LOVO等不同轉(zhuǎn)移潛能結(jié)腸癌細胞系中Twist1、snail、E-cadherin、vimentin、β-catenin等上皮間質(zhì)化相關(guān)基因mRNA和蛋白表達情況,與TFF1和TFF3表達趨勢對比,判斷相互關(guān)

18、系。
  結(jié)果:HIEC、HT29、SW620、LOVO四種細胞株中的E-cadherin mRNA表達量分別為0、7.247±2.687、0.888±0.271和0,而蛋白表達量為322.2±76.8、2281±135.6、641.1±57.4和285.6±43.46。HT29和SW620結(jié)腸癌細胞系中E-cadherin mRNA和蛋白相對表達量均較正常腸上皮細胞高(P<0.05),且隨細胞系轉(zhuǎn)移潛能的逐漸增強,E-cadhe

19、rin mRNA和蛋白表達量逐漸降低(P<0.05)。Vimentin mRNA表達量分別為0.752±0.121、1.334±0.317、1.940±0.213和0.005,而蛋白表達量分別為492.8±67.5、953.1±74.8、1622±108.4和141.2±33.4??梢奦imentin mRNA和蛋白在HT29和SW620結(jié)腸癌細胞系中表達較正常腸上皮細胞系高,而LOVO細胞系中不表達。高轉(zhuǎn)移細胞系SW620中表達量較低

20、轉(zhuǎn)移潛能細胞系HT29無顯著性差異,但較正常腸上皮細胞系明顯高(P<0.05)。β-catenin mRNA表達量分別0.368±0.132、3.560±1.806、1.868±0.222和0.619±0.588,而蛋白表達量8814±1363、20962±1584、12372±1160、5096±748.5??梢娬Dc上皮細胞系中表達低,而結(jié)腸癌細胞系中表達量均升高,且隨結(jié)腸癌細胞系轉(zhuǎn)移潛能的增強,β-catenin mRNA和蛋白表

21、達量逐漸下降(P<0.05)。Snail mRNA表達量分別0.255±0.013、1.650±0.225、1.910±0.253和0.033±0.025,而蛋白表達量448±104.5、544±107.2、1341±84.3和130.2±26.2??梢娬Dc上皮細胞系中表達低,而HT29和SW620結(jié)腸癌細胞系中表達量均升高,且隨結(jié)腸癌細胞系轉(zhuǎn)移潛能的增強,Snail mRNA和蛋白表達量逐漸上升趨勢(P<0.05)。隨著三個結(jié)腸癌細

22、胞系轉(zhuǎn)移潛能的增強,E-cadherin、β-catenin(上皮細胞標志物)的表達量逐漸下降。vimentin、snail和Twist1等(間充質(zhì)細胞標志物)表達量逐漸增高。
  結(jié)論:TFF1和TFF3在上皮間質(zhì)化過程中起一定作用,而在此過程中TFF1和TFF3可能起相反作用。
  第四部分:維漢民族結(jié)直腸癌患者臨床病理特點及預后的對照研究
  目的:探討新疆地區(qū)結(jié)直腸癌病例在維吾爾族及漢族之間的分布、臨床病理特征

23、以及預后情況。
  方法:收集自2000年1月至2007年12月間就診于新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院,經(jīng)病理證實的漢族和維吾爾族結(jié)直腸癌患者1421例資料,分析并比較其分布、臨床病理特征及預后情況。
  結(jié)果:本組1421例中,漢族1210例(年齡19~92歲,平均年齡62.3±4.5),維族211例(年齡17~87歲,平均年齡52.4±15.6)。維漢民族結(jié)直腸癌患者在性別、年齡、職業(yè)、血型、組織類型等因素構(gòu)成比有顯著性差異(

24、P<0.05)。本組生存時間為7個月~122個月,平均為46.11個月。漢族患者中位總生存率、無病生存率和腫瘤相關(guān)生存率分別為45、62和65個月,而維族患者分別為42、49和61個月,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000,P=0.005, P=0.007)。所有患者總生存率為1年87.0%,3年49.1%,5年16.7%。
  結(jié)論:維吾爾族結(jié)直腸癌患者較漢族患者具有較年輕發(fā)病,腫瘤惡性程度相對較高,預后不良的特點。應(yīng)該重視此特點,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論