TGF-β-Smad信號通路對鼻咽癌預(yù)后影響及體外實驗研究.pdf

1、本研究擬從監(jiān)測鼻咽癌患者治療前后血清中。TGF-β1的表達水平入手，分析TGF-β1與鼻咽癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系；再進一步檢測TGF-β1及其信號傳導(dǎo)通路中各關(guān)鍵分子，包括TGF-β1及其兩個受體TβRI、TβR Ⅱ和此信號通路下游關(guān)鍵分子Smad4，在鼻咽癌病理組織中的表達情況，進一步分析鼻咽癌病理組織中TGF-β1及其信號傳導(dǎo)通路中各關(guān)鍵分子與鼻咽癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系；然后在鼻咽癌細胞株中通過檢測，篩選出能完全表達TGF-

2、β1及其信號傳導(dǎo)通路中各關(guān)鍵分子的鼻咽癌細胞株，為進一步的體外研究尋找合適的研究對象；最后利用外源性TGF-β1作用于已經(jīng)篩選出的鼻咽癌細胞株，觀察TGF-β/Smad信號通路對鼻咽癌生長、分化及凋亡等方面的影響，從而明確TGF-β/Smad信號通路對鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展的作用機制。本研究預(yù)期為鼻咽癌患者制定合理的分層治療方案提供可靠的理論依據(jù)，并為以基因為靶點的治療手段的研究提供新的策略和途徑。 第一部分　鼻咽癌患者血清中TGF-

3、β1的檢測及其臨床意義 目的： 檢測TGF-β1在鼻咽癌患者血清中的表達水平，進一步分析它與鼻咽癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。 方法： 采用ELISA實驗方法檢測156例鼻咽癌患者血清中的TGF-β1表達水平，應(yīng)用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)論： 鼻咽癌患者治療前血清中的TGF-β1濃度明顯高于正常人，而且患者治療前血清中TGF-β1濃度明顯高于治療后，治療前血清中TGF-β1

4、濃度與頸淋巴結(jié)N分期、92’臨床分期和治療后有無遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)性具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義，TGF-β1高濃度組3年總生存率、3年無進展生存率、3年無復(fù)發(fā)生存率及3年無轉(zhuǎn)移生存率均較低濃度組差，高濃度TGF-β1是鼻咽癌患者總生存率、無進展生存率及無轉(zhuǎn)移生存率的不良預(yù)后因素，說明血清中TGF-β1濃度可能成為診斷和預(yù)測鼻咽癌預(yù)后的分子指標(biāo)。 第二部分　TGF-β1及其信號通路分子在鼻咽癌組織中的表達及其臨床意義 　　目的：

5、 檢測TGF-β1及其信號通路關(guān)鍵分子(TβR Ⅰ、TβR Ⅱ和Smad4)在鼻咽癌組織中的表達水平，探討其與鼻咽癌臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。 方法： 采用免疫組化方法檢測91例鼻咽癌患者TGF—β1及其兩個受體TβR Ⅰ、TβR Ⅱ和此信號通路下游分子Smad4在組織中的表達情況，分析它們與鼻咽癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。 結(jié)論： 在鼻咽癌組織中，TGF-β1表達陽性患者較陰性患者5年總生存率、5年無進

6、展生存率、5年無復(fù)發(fā)生存率及5年無轉(zhuǎn)移生存率均明顯下降，說明TGF-β1陽性表達者易發(fā)生局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，并導(dǎo)致生存率明顯降低，表明TGF-β1對鼻咽癌患者的預(yù)后發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，可能是通過TGF-β1對腫瘤的抑制作用減弱或者其腫瘤促進作用的增強。多因素Cox回歸模型判斷預(yù)后因素，結(jié)果顯示TGF-β1可能是無復(fù)發(fā)生存的獨立預(yù)后因素。 第三部分　外源性TGF-β1調(diào)控鼻咽癌細胞株生長、分化及凋亡的實驗研究 　　目的：

7、 篩選可以應(yīng)用于體外研究的完全表達TGF-β1信號通路的鼻咽癌細胞株、觀察外源性TGF-β1對此細胞株生長、分化及凋亡等的影響情況，初步分析得出TGF-β1對鼻咽癌的體外作用機制，為進一步研究其體內(nèi)作用機制提供可以參考的依據(jù)。 方法： 以鼻咽高分化鱗癌CNE-1和鼻咽低分化鱗癌CNE-2細胞株為研究對象，采用免疫組化技術(shù)對鼻咽癌細胞株進行染色，篩選出可以應(yīng)用于體外研究的完全表達TGF-β1信號通路的鼻咽癌細胞株為進

8、一步研究對象。用MTT法檢測外源性TGF-β1對細胞生長的影響情況，用流式細胞儀檢測外源性TGF-β1對鼻咽低分化癌CNE-2細胞株細胞周期和凋亡的影響，用熒光顯微鏡檢測外源性TGF-β1誘導(dǎo)鼻咽低分化癌CNE-2細胞株凋亡的情況。 結(jié)論： 鼻咽低分化癌CNE-2細胞株存在TGF-β1自分泌現(xiàn)象，且TGF-β1信號傳導(dǎo)通路中各關(guān)鍵分子在CNE-2細胞株中均有表達，這說明可以應(yīng)用鼻咽低分化癌CNE-2細胞株進行該信號通路的