

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、炎癥反應是機體清除入侵病原體而引發(fā)的一個生理和病理性反應。機體在病原刺激后,通過調節(jié)免疫系統(tǒng)將病原體清除,是一種生理性的防御反應;在此過程中,如炎癥反應過度,大量炎性因子分泌,將造成組織的炎性損傷,導致多種急、慢性炎癥反應性疾病的發(fā)生(如:膿毒癥、風濕性關節(jié)炎、糖尿病等,嚴重的甚至危及生命),此時的炎癥反應又是一種病理性的損傷反應。因此,研究炎癥反應的調控過程具有重要的意義。 炎癥反應主要通過炎性細胞和炎性因子來完成,炎性因子的
2、分泌由促炎癥因子調控,促炎癥因子的轉錄合成又受嚴格的信號轉導通路調控,其中NF-kappaB(NF-kB)通路是其主要調節(jié)通路。促炎癥因子主要包括一些細胞因子和其他的酶類。TNF和IL-1是最關鍵的炎性細胞因子,關鍵酶類有誘生型一氧化氮合酶(iNOS)和環(huán)氧合酶-2(COX-2)等?,F(xiàn)己證實,他們的異常產生與炎癥反應性疾病有關。近年研究發(fā)現(xiàn),NF-KB是調節(jié)促炎癥因子產生的重要轉錄因子,某些疾病NF-kB的活性高于正常人。抑制NF-kB
3、可以抑制iNOS和COX-2的合成。LPs激活NF-kB信號通路須要信號轉導分子腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)的存在,在LPS活化其受體TLR4之后,TRAF6自身泛素化,激活下游的IKK及NF-kB,啟動基因的轉錄。 誘生型熱休克蛋白70(Hsp70)是細胞在應激條件下產生的最重要的一種熱休克蛋白,對于維持正常生理狀態(tài)下和病理狀態(tài)下的細胞完整性具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn),Hsp70具有抑制NF-kB的激活并能抑制iNOS
4、和COX-2的產生的作用,機理并不十分清楚。為此,我們研究探討了Hsp70與TRAF6的相互作用以及對NF-kB通路的影響。我們研究發(fā)現(xiàn): 1.Hsp70與TRAF6結合,結合區(qū)域位于TRAF6的C端TRAF-C結構域。將 Flag-TRAF6質粒和Xpress-Hsp70以磷酸鈣共沉淀法轉入HEK293細胞,免疫沉淀和免疫印跡法研究發(fā)現(xiàn)TRAF6與Hsp70能產生共沉淀。Hsp70與TRAF6的結合區(qū)域為Hsp70含有多肽底物
5、結合結構域的C端。在小鼠來源巨噬樣細胞RAW264.7細胞株中,發(fā)現(xiàn)熱休克誘導產生的Hsp70與內源性TRAF6結合,并且在一定的時間范圍內隨著LPS的刺激Hsp70與TRAF6結合明顯減少,提示Hsp70可能通過結合TRAF6對NF-KB的激活發(fā)揮影響。 2.Hsp70通過與TRAF6結合抑制NF-KB信號通路。為了研究Hsp70對NF-KB 信號通路的調節(jié)作用,建立了穩(wěn)定表達Hsp70的RAW264.7細胞株。與穩(wěn)定轉染p
6、cDNA3質粒的對照細胞相比,穩(wěn)定表達Hsp70的RAW264.7細胞中 LPS激活的IKK磷酸化和IkB的降解被抑制。熱刺激后RAW264.7細胞經 LPS刺激,觀察到類似的抑制效應。但由于熱休克在誘導了Hsp70表達的同時,也使IKKB的蛋白量減少,因此,熱休克對于NF-kB信號通路的抑制效應可能不僅僅是由于其與TRAF6的相互作用。應用NF-kB熒光素酶報告基因研究發(fā)現(xiàn),Hsp70抑制TRAF6過表達激活的NF-kB和LPS激活的
7、NF-kB。在產物水平,應用免疫印跡法研究發(fā)現(xiàn)Hsp70抑制LPS誘導的iNOS和 COX-2的表達。 3.Hsp70抑制TRAF6的泛素(Ub)化修飾。TRAF6被泛素分子以第63位賴氨酸(K63)的形式修飾,該種修飾是TRAF6的活化形式。在HEK293細胞,通過共轉染Flag-TRAF6質粒、HA-Ub質粒以及Flag-TRAF6質粒、HA-Ub質粒和Xpress-Hsp70質粒的共轉染,發(fā)現(xiàn)TRAF6被明顯泛素化修飾,
8、Hsp70的表達明顯抑制了TRAF6的泛素化,表明Hsp70可能通過抑制TRAF6泛素化抑制NF-kB信號通路。 4.Hsp70抑制NF-kB和TRAF6泛素化的作用需要全長Hsp70蛋白分子。作為分子伴侶,Hsp70具有N-端的ATP結合結構域和C-端的多肽底物結構域及一個可變的C-端的結構域。我們的研究表明,含有ATP結合結構域的Hsp70缺失突變體和含多肽底物結合結構域C端的Hsp70缺失突變體均不能抑制 NF-KB的激活
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 熱休克蛋白70結合TRAF6調節(jié)LPS激活的NF-κB信號通路的研究.pdf
- 熱休克蛋白70在LPS激活的信號通路中的作用.pdf
- HSV-1早早期蛋白ICP0泛素化TRAF6并協(xié)同其激活NF-κB.pdf
- 熱休克蛋白27調控LPS和IL-1β激活的胞內信號通路的研究.pdf
- 熊果酸通過NF-κB信號通路抑制小鼠T細胞激活的研究.pdf
- 肺炎嗜衣原體熱休克蛋白經ERK、NF-κB信號通路調控HUVEC分泌炎癥因子.pdf
- 激活NF-κB信號通路的TGEV蛋白篩選及功能域確定.pdf
- 構建抑制NF-κB信號通路的藥物篩選模型.pdf
- 乙肝病毒X蛋白激活NF-κB信號通路對AFP表達的影響.pdf
- 熱休克蛋白70對LPS誘導的急性肝損傷的影響.pdf
- NF-κB介導LPS對家蠶表皮蛋白基因BmCPT1的激活.pdf
- 泛素連接酶ANKIB1調節(jié)TRAF6介導的NF--kB信號通路.pdf
- 缺血后處理對肺移植早期NF-κB激活信號通路的影響.pdf
- miR-125b通過負調控NF-κB信號通路抑制PRRSV增殖.pdf
- 苦瓜提取物通過抑制NF-κB的信號通路降低炎癥反應.pdf
- 擬穴青蟹TRAF6調控抗脂多糖因子(ALFs)表達及參與免疫信號通路TLR-NF-κB的研究.pdf
- PRRSV調控NF-κB信號通路的機制研究.pdf
- 骨橋蛋白激活NF-κB信號通路調控OA滑膜細胞MMP13表達的實驗研究.pdf
- TRAF6蛋白相互作用蛋白的篩選與鑒定.pdf
- MicroRNA-146a通過抑制TRAF6-NF-κB通路減輕椎間盤細胞炎癥反應.pdf
評論
0/150
提交評論