骨橋蛋白激活NF-κB信號通路調控OA滑膜細胞MMP13表達的實驗研究.pdf

1、目的：骨性關節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種常見的慢性關節(jié)病。其發(fā)病率隨著年齡增長逐漸增加。其病理特征為原發(fā)或繼發(fā)性的關節(jié)軟骨病變，具體表現為關節(jié)軟骨膠原蛋白降解、蛋白多糖降解和關節(jié)軟骨結構破壞，同時也會導致一定程度的滑膜炎癥。WHO數據顯示，10%男性及18女性%以及65%年齡超過60歲的人都患有不同程度的骨關節(jié)炎。雖然 OA的病因是比較復雜的（遺傳，體質，生物力學因素），但我們對 OA的發(fā)病機制的認識正不斷加深。骨橋

2、蛋白（Osteopontin，OPN）是一種廣泛分布于人體組織中，具有多種功能的磷酸化蛋白。OPN可由多種細胞分泌，包括巨噬細胞、淋巴細胞、上皮細胞、血管平滑肌細胞、滑膜細胞以及軟骨細胞。在骨組織中，OPN可調節(jié)細胞基質和細胞間的活動，參與骨折修復中軟骨向骨的轉化以及破骨細胞對骨基質的附著。骨橋蛋白（Osteopontin，OPN）與骨關節(jié)炎的嚴重程度及疾病的發(fā)生進展密切相關，但OPN在OA發(fā)病機制中的作用尚未明確。本研究目的旨在探討骨

3、橋蛋白在膝骨關節(jié)炎（Osteoarthritis，OA）中的調控作用以及涉及的信號轉導通路。
　　方法：
　　1.選取15名OA患者其中男性7例，女性8例，平均年齡61.2±8.5歲。選取同期正常對照組15例，為不伴有骨關節(jié)炎的半月板損傷或韌帶損傷。對照組男性9例，女性6例，平均年齡42.4±7.8歲。II型膠原酶一步消化法處理OA滑膜組織，分離培養(yǎng)OA軟骨細胞并傳代，取第一代OA軟骨細胞繼續(xù)培養(yǎng)。
　　2.根據文獻報

4、道siRNA序列，合成OPN-siRNA，與OPN組作為實驗組，無意義序列Con-siRNA為陰性對照組，將兩組序列進行脂質體轉染，采用Western Blotting檢測NF-κB(nuclear factor-KappaB)p65、p-NF-κB p65的蛋白水平，將得到的Western blot圖片，用IPP軟件處理，得出灰密度值，進行目的蛋白NF-κB/p-NF-κB的均一化處理和內參蛋白β-actin的均一化處理，將濃度組得到

5、的NF-κB/p-NF-κB p65的均一化結果除以β-actin的結果，得到各組的相對定量值。
　　3.以轉染Con-siRNA的OA滑膜細胞為對照組，轉染OPN-siRNA、OPN、PDTC及PDTC聯合OPN處理細胞為實驗組。用Western blot檢測MMP13表達情況。用上述方法得到各組相對定量值。
　　結果：相比對照組，經 OPN干預后，P65含量及 P65磷酸化顯著增加(P=0.0025，P=0.0019)。

6、然而，OPN-siRNA處理后的 P65含量及 P65磷酸化相比對照組顯著降低(P=0.0024，P=0.0176)。OPN可顯著提高MMP13蛋白含量（P=0.0075），而OPN-siRNA可顯著降低蛋白含量（P=0.0021），NF-κB抑制劑（PDTC）可明顯拮抗OPN對MMP13蛋白的調控(P=0.0231)。
　　結論：OPN可促進OA滑膜細胞NF-κB p65、p-NF-κB p65的蛋白表達，并通過激活NF-κB信