IL-35在病毒性心肌炎發(fā)病中的作用及其機制研究.pdf

1、病毒性心肌炎(Viral myocarditis,VMC)是一種病毒感染引起的心血管疾病，多種病毒都可引VMC，其中以腸道病毒Coxsackievirus B3(CVB3)感染最常見，嚴重危害人類健康。目前研究認為，CVB3誘導的心肌炎發(fā)病機理包括病毒對心肌的直接損傷和過強免疫應答導致的間接損傷，但其具體的發(fā)病機制并未完全闡明。
　　IL-35是新發(fā)現(xiàn)的由Treg細胞特異性產生的IL-12細胞因子家族新成員，結構上是由p35和EB

2、I3亞基組成的異源二聚體，是Treg細胞發(fā)揮最大抑制效應所必須的一種細胞因子。它可以擴增Treg細胞，誘導iTR35細胞產生和促進Th1細胞分化，以及抑制效應T細胞產生和Th17細胞分化，在自身免疫病、病毒感染和真菌感染等疾病中發(fā)揮重要作用。為了探討IL-35在CVB3感染的病毒性心肌炎發(fā)病中的作用及其機制，我們建立了CVB3誘導的BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型，通過病理切片及其評分顯示心肌炎炎癥程度在感染后第0、3、5、7天的動態(tài)變

3、化情況，同時運用ELISA方法檢測了病毒性心肌炎小鼠心臟中IL-35在CVB3感染后第0、1、3、5、7、9天動態(tài)表達情況，并對第七天小鼠心肌組織病理評分、體重改變與心肌組織中IL-35表達分別做了相關性分析。在此基礎上，我們通過PEI包裹IL-35真核表達質粒，腹腔注射老鼠的方法過表達模型小鼠心肌組織中IL-35，并運用FACS、ELISA、Real-time PCR等實驗技術檢測相關指標，研究IL-35在VMC中發(fā)病的作用及其機制。

4、
　　首先我們通過建立雄性BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型，研究病毒性心肌炎中IL-35的表達與心肌炎發(fā)病嚴重程度的相關性。我們記錄了CVB3感染后小鼠體重變化情況，通過病理切片觀察CVB3感染后第0、3、5、7天心肌炎炎癥嚴重程度變化，運用ELISA的方法檢測感染后第0、1、3、5、7、9天心臟中IL-35表達水平，并對感染后第七天兩者做了相關性分析。結果發(fā)現(xiàn):雄性BALB/c小鼠在CVB3感染后第3天左右體重明顯下降并持續(xù)減輕

5、，同時心肌組織出現(xiàn)明顯病變并逐漸加劇，而IL-35的表達在感染后第1、3天逐漸升高，第5、7、9天逐漸下降。并且第七天心肌組織中IL-35的表達與小鼠體重下降和心肌評分呈負相關。隨后，我們研究IL-35在病毒性心肌炎中的作用及其可能的機制，通過腹腔注射PEI包裹的IL-35質粒在心肌組織中過表達IL-35，隨后觀察小鼠感染CVB3后一系列體征變化，包括生存率、體重變化曲線、心體比、CK、CK-MB以及心肌病理評分，我們發(fā)現(xiàn)過表達IL-3

6、5對CVB3誘導的病毒性心肌炎具有保護作用，與未處理組和載體FC組相比得到顯著改善,且心肌組織中病毒載量和病毒復制都有顯著下降。由于CVB3感染引起的對心肌組織的炎癥反應的特異性免疫應答，是其發(fā)病的重要機制之一。研究認為Th17細胞和Treg細胞在病毒性心肌炎中扮演中重要免疫調節(jié)作用，在我們的實驗中，感染CVB3后第七天的小鼠體內，過表達IL-35抑制了脾臟Th17細胞及其相關細胞因子的表達，而對Treg細胞表達沒有顯著影響；心臟中Th

7、17相關促炎細胞因子TNF-α、IL-17A、IL-6表達與對照組相比，均有顯著下調。
　　綜上所述，本研究首次在CVB3誘導的病毒性心肌炎模型中動態(tài)檢測心肌組織中IL-35的表達情況，發(fā)現(xiàn)在心肌炎癥高峰期IL-35下調表達，并且IL-35表達與病毒性心肌炎發(fā)病呈負相關；過表達IL-35對病毒性心肌炎具有保護作用，其機制可能是通過抑制Th17細胞及其心肌組織中相關促炎細胞因子的表達。本研究闡述了IL-35在病毒性心肌炎發(fā)病過程中的