Sema7A在CVB3誘導(dǎo)的病毒性心肌炎中的作用及其機制.pdf

1、病毒性心肌炎(VMC)是一種常見的臨床心血管系統(tǒng)疾病，多引起心肌細胞壞死和間質(zhì)炎性細胞浸潤，進一步發(fā)展為擴張性心肌病，甚至導(dǎo)致心臟衰竭。近年來，在世界范圍內(nèi)病毒性心肌炎的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，主要患者是兒童及嬰幼兒。多種病毒感染可引起心肌炎，如柯薩奇病毒、巨細胞病毒、?？刹《?、HIV病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、腺病毒等，其中以腸道病毒尤其是柯薩奇病毒B3型（CVB3）這種無囊膜包被的單股正鏈小RNA病毒最為常見。迄今為止，VMC的致病機制尚不

2、完全清楚，也無完全有效的治療手段。研究表明，病毒感染前期病毒對心肌細胞的直接損害及后期由于免疫應(yīng)答引起的損傷是心肌炎發(fā)病的原因，其中過強的免疫應(yīng)答是主要原因，所以目前臨床上主要是通過抗病毒和控制炎癥的來改善病毒性心肌炎的發(fā)病情況。越來越多的報道發(fā)現(xiàn)Sema7A除了在神經(jīng)軸突、腫瘤抑制、組織重塑等方面有重要作用外，還在病毒感染、皮膚炎癥、角膜炎癥、肺纖維化、肝纖維化、神經(jīng)損傷和多種硬化癥中調(diào)控炎癥反應(yīng)。例如腸上皮細胞（IEC）衍生的Sem

3、a7A可在葡聚糖硫酸酯鈉誘導(dǎo)下的結(jié)腸炎模型中，通過調(diào)控炎性因子IL-10的表達，負調(diào)控結(jié)腸炎的發(fā)病過程。體外實驗證實 Sema7A對單核細胞具有趨化性并且可以誘導(dǎo)促炎因子如IL-8、TNF-α、IL-6的產(chǎn)生。而且Sema7A表達上調(diào)時可以通過與α1β1整合素受體結(jié)合活化單核細胞分泌促炎因子IL-8，而當α1β1整合素封閉后，促炎作用明顯減弱。在眼角膜炎癥模型中，Sema7A通過與T細胞表面α1β1整合素結(jié)合介導(dǎo)單核巨噬細胞的浸潤并發(fā)揮

4、促炎作用。但是也有研究表明 Sema7A通過與腸道巨噬細胞上的αvβ1整合素結(jié)合發(fā)揮了抑炎作用。這些實驗結(jié)果提示我們Sema7A可能由于結(jié)合受體不同，在控制炎癥反應(yīng)中發(fā)揮不同的作用。
　　本研究建立了CVB3誘導(dǎo)的病毒性心肌炎模型，檢測了Sema7A在病毒性心肌炎中的表達水平，我們發(fā)現(xiàn) Sema7A的表達在0-7天隨病程的發(fā)展呈逐漸上升趨勢，提示我們Sema7A可能參與了病毒性心肌炎疾病的進程。接著我們利用Sema7A下調(diào)質(zhì)粒及上

5、調(diào)質(zhì)粒（日本大阪大學(xué)Atsushi Kumanogoh教授饋贈），通過PEI包裹質(zhì)粒，眼眶靜脈注射小鼠，調(diào)節(jié)Sema7A在小鼠體內(nèi)的表達情況，結(jié)果表明，Sema7A下調(diào)組小鼠能夠顯著緩解病毒性心肌炎的癥狀，心臟功能顯著改善，小鼠死亡率下降，證實Sema7A在病毒性心肌炎中發(fā)揮重要作用。通過檢測心臟中炎性細胞因子的分泌情況，我們發(fā)現(xiàn)下調(diào)Sema7A可以有效的抑制炎性應(yīng)答。最后我們進行了機制探討，前期我們實驗室已有研究證明，巨噬細胞在病毒性

6、心肌炎的發(fā)病進程中發(fā)揮重要作用。在CVB3誘導(dǎo)的心肌炎模型中，存在α1β1整合素巨噬細胞和αvβ1整合素巨噬細胞，并且這兩類巨噬細胞產(chǎn)生的炎性因子不同，α1β1整合素巨噬細胞和αvβ1整合素巨噬細胞比較，能夠分泌大量促炎因子。我們在Sema7A中和抗體處理實驗中發(fā)現(xiàn)，α1β1整合素巨噬細胞數(shù)目變化具有顯著差異，而αvβ1整合素巨噬細胞無明顯表達。而且，我們發(fā)現(xiàn)心肌細胞在CVB3的刺激下可以表達Sema7A，并且在共培養(yǎng)分選的未活化的巨噬

7、細胞與CVB3刺激的心肌細胞，發(fā)現(xiàn)α1β1整合素巨噬細胞數(shù)目顯著增加，這提示我們Sema7A可以通過激活α1β1整合素巨噬細胞而發(fā)揮促炎作用。綜上所述，我們認為CVB3感染能誘導(dǎo)心臟Sema7A的表達，而Sema7A通過結(jié)合α1β1整合素受體活化心臟內(nèi)浸潤的巨噬細胞，促進巨噬細胞參與病毒性心肌炎的發(fā)生。我們通過體內(nèi)體外實驗初步明確了Sema7A在CVB3感染引起的病毒性心肌炎中的作用，從而進一步闡明了病毒性心肌炎的發(fā)病機制，為病毒性心肌