納米級脂質超聲微泡造影劑在超聲顯像及介導基因轉染中的應用研究.pdf

1、第一部分超聲微泡破裂法聯(lián)合陽離子脂質體介導基因轉染的實驗研究
　　目的:探討超聲微泡破裂法聯(lián)合陽離子脂質體(cationic liposome,CL)介導綠色熒光蛋白質粒在肝癌細胞(HepG2)基因轉染的可行性,并探索最佳轉染條件。
　　方法:依次采用培養(yǎng)液中是否含有血清和不同的CL濃度、不同超聲輻照時間點、不同納米級脂質微泡造影劑(nano-liposomal bubble,NB)濃度等處理因素進行細胞基因轉染。熒光顯微鏡

2、和流式細胞儀檢測基因轉染效率,CCK-8法檢測細胞活性,以獲得優(yōu)化的轉染參數。
　　結果:血清能降低CL的細胞毒性,但對基因轉染效率無明顯影響,CL與質粒DNA質量比為4:1時可以達到相對高效低毒的轉染效果,細胞轉染率和存活率分別為(17.71±0.79)％和(91.28±0.76)%。CL聯(lián)合1小時時間點輻照超聲可以提高轉染率至(24.85±0.78)%(P<0.01),加入10%的NB可進一步提高轉染率至(32.47±4.01

3、)%(P<0.05)。
　　結論:超聲微泡破裂法可以有效增強陽離子脂質體介導的基因轉染,聯(lián)合應用為基因治療提供了新思路。
　　第二部分納米級脂質超聲微泡造影劑制備工藝優(yōu)化及其性質研究
　　目的:比較自制納米級脂質超聲微泡造影劑(nano-liposomal bubble,NB)和商用超聲微泡造影劑聲諾維(SonoVue)在體內顯像效果和介導細胞基因轉染的差異。
　　方法:使用兩種不同的方法制備NBⅠ和NBⅡ。觀察

4、SonoVue、NBⅠ和NBⅡ對兔正常肝臟和VX2肝腫瘤的超聲造影顯像效果差異。并使用上述三種微泡聯(lián)合超聲輻照來介導pEGFP質粒轉染HepG2細胞,熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測細胞轉染率,CCK-8法檢測細胞毒性。
　　結果:NBⅠ、NBⅡ在兔正常肝臟實質的超聲造影顯影時間均長于SonoVue(P<0.05),且NBⅡ顯影強度最高(P<0.05)。三種微泡在兔VX2肝腫瘤的顯影效果相似,均為動脈相腫瘤環(huán)狀高增強,實質相腫瘤無增強,