構(gòu)建阿霉素核-H亞基鐵蛋白且用于藥效分析、抑制HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、人鐵蛋白由于具有獨(dú)特的納米籠狀結(jié)構(gòu)、合適的大小、良好的生物安全性以及易于通過(guò)化學(xué)或遺傳學(xué)的方法進(jìn)行表面改造等特性而成為理想的腫瘤靶向給藥載體,因而受到了科學(xué)家們的廣泛關(guān)注。本文構(gòu)建了pET-21 b-FTH1、pET-28a-FTH1和pGEX-4T-1-FTH1三種人鐵蛋白H亞基原核表達(dá)載體,經(jīng)檢測(cè),三種表達(dá)載體中pGEX-4T-1-FTH1的表達(dá)效率最高,且在0.3 mM IPTG、25℃條件下誘導(dǎo)表達(dá)能夠同時(shí)兼顧表達(dá)效率和融合蛋白

2、溶解性。經(jīng)SDS-PAGE與PMF鑒定,pGEX-4T-1-FTH1表達(dá)的重組融合蛋白在切除GST標(biāo)簽后確為人鐵蛋白H亞基。而且,經(jīng)透射電子顯微鏡觀(guān)察,重組人鐵蛋白H亞基能夠在生理?xiàng)l件下自發(fā)組裝成缺鐵核人H亞基鐵蛋白(HFt)的納米籠狀結(jié)構(gòu)。
  阿霉素與順鉑均為臨床上治療腫瘤的一線(xiàn)用藥,但它們都存在半衰期短、副作用大等不足。本文首先構(gòu)建了阿霉素核-H亞基鐵蛋白(D-HFt),其阿霉素包裝量約為24.8%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))。熒光顯微鏡觀(guān)

3、察顯示,F(xiàn)ITC標(biāo)記的HFt能與HepG2細(xì)胞靶向結(jié)合并進(jìn)入細(xì)胞的內(nèi)部。異體移植HepG2腫瘤的裸鼠活體(in vivo)與離體(ex vivo)成像顯示,近紅外熒光染料Cy7.5標(biāo)記的D-HFt在荷瘤裸鼠體內(nèi)的半衰期較阿霉素要長(zhǎng)得多,且D-HFt具有很好的腫瘤靶向性。異體移植HepG2腫瘤裸鼠的治療實(shí)驗(yàn)顯示,在同等給藥劑量和給藥頻率的條件下,D-HFt對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制情況優(yōu)于阿霉素。同時(shí),治療后荷瘤裸鼠主要器官石蠟切片的蘇木精—伊紅染

4、色顯示未觀(guān)察到D-HFt對(duì)荷瘤裸鼠的主要器官造成明顯的病理異常如出血、水腫、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、壞死等現(xiàn)象。
  液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)是目前蛋白質(zhì)組學(xué)研究的主要技術(shù)手段之一。本文利用LC-MS對(duì)D-HFt與阿霉素作用于HepG2細(xì)胞24 h后的差異表達(dá)蛋白質(zhì)組進(jìn)行了研究,找到了37個(gè)差異表達(dá)的蛋白。其中EEF1A1等19個(gè)蛋白在D-HFt組中表達(dá)上調(diào),CFL1等18個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)。這些結(jié)果為進(jìn)一步研究D-HFt較阿霉素具

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