CDK2干擾RNA對人肝癌細胞HepG2全細胞蛋白質組的影響.pdf

1、目的：觀察穩(wěn)定轉染CDK2干擾RNA對人肝癌細胞株HepG2細胞周期、增殖活性及全蛋白質組表達的變化，以探討CDK2在肝癌生物學進程中的作用，為肝癌發(fā)病機理的研究及其早期診斷、治療提供新的、有效的分子靶點。 方法：應用分子生物學技術，構建CDK2干擾RNA真核表達載體PGnesil-1-CDK2，并用脂質體介導法轉染肝癌細胞株HepG2細胞，G418篩選陽性轉染細胞克隆，檢測其細胞周期、細胞生長曲線的改變，通過RT-PCR及雙向

2、凝膠電泳一質譜技術比較轉染前后CDK2 mRNA的表達和全細胞蛋白質的變化。 結果： (1)成功構建CDK2干擾RNA真核表達載體PGenesil-1-CDK2，并用脂質體法導入肝癌細胞株HepG2細胞中，且有效表達，使HepG2細胞中CDK2 mRNA表達水平降低。 (2)CDK2干擾RNA轉染HepG2細胞后，經(jīng)G418篩選獲得陽性克隆命名為PCDK2-siRNA-HepG2。與轉染空質粒組的PHK-siRN

3、A-HepG2細胞和未轉染組的HepG2細胞相比，PCDK2-siRNA-HepG2組細胞的生長速度減慢，G1期細胞增多，G2/M和S期細胞減少。 (3)通過雙向電泳-圖像分析-質譜技術得到10個差異表達的蛋白質。其中7種在穩(wěn)定轉染組細胞PCDK2-siRNA-HepG2中不表達，3種表達下調(diào)。 結論： (1)成功構建CDK2干擾RNA真核表達載體PGenesil-1-CDK2。 (2)CDK2干擾RNA