靈長類動物分枝桿菌感染免疫發(fā)病機制及免疫治療的實驗研究.pdf

1、第一部分、分枝桿菌感染的免疫發(fā)病機制研究 目的：全面系統(tǒng)的了解分枝桿菌感染后機體的免疫反應。方法：以靈長類動物為模型，采用靜脈注射的方式感染BCG，然后在不同時間點抽取實驗動物的外周血，并進行支氣管肺泡灌洗(BAL)得到BAL液。采用全血染色、BAL液細胞染色、分離外周血淋巴細胞(PBL)、酶聯(lián)免疫吸附斑點(ELISPOT)、細胞內(nèi)細胞因子染色(ICS)及外周血BCG菌落(CFU)計數(shù)等方法，對實驗動物的T淋巴細胞數(shù)量和功能進行

2、了全面分析。結(jié)果：實驗動物在感染BCG后，外周血和局部組織中的CD3+CD4+和CD3+CD8+T細胞的數(shù)量及亞群分布變化不大，但對分枝桿菌特異性抗原，PPD的反應大大增強，且可持續(xù)六周。而外周血和局部組織中Vγ2V82+T細胞數(shù)量在BCG感染后第三、四周后均明顯增加，并且以效應細胞(EM)增加為主，同時對分枝桿菌特異性抗原，HMBPP的反應顯著增強，且持續(xù)長達十余周。同時外周血BCG CFU計數(shù)也于第三周開始消失。結(jié)論：CD3+CD4

3、+、CD3+CD8+及V72V82+T細胞均參與了機體對分枝桿菌感染的免疫反應，其中以Vγ2V82+T細胞的變化最為顯著。因此Vγ2V82+T細胞很有可能在分枝桿菌感染的保護性免疫反應中起著相當重要的作用。 第二部分、HMBPP免疫藥效動力學研究 目的：了解HMBPP(4-hydroxy-3-methyl-but-2-enyl-pyrophosphate)在實驗動物體內(nèi)對T細胞的作用。方法：以靈長類動物為模型，先用HMB

4、PP在體外刺激其PBL，了解Vγ2V82+T細胞增殖情況。然后將實驗動物分為四組：對照組、HMBPP組、IL-2組和HMBPP+IL-2組。對相應動物給予肌注HMBPP和/或皮下注射IL-2，然后在不同時間點抽取實驗動物的外周血，并進行支氣管肺泡灌洗得到BAL液。采用全血染色、BAL液細胞染色、分離PBL、ELISPOT、ICS等方法，對實驗動物的T淋巴細胞數(shù)量和功能進行了分析。結(jié)果：HMBPP在IL-2同時存在的情況下，不僅可以在體外

5、刺激實驗動物Vγ2V82+T細胞增殖，而且在體內(nèi)同樣可以刺激Vγ2V82+T細胞的大幅度增殖，包括外周血和局部組織。同時抗原特異性Vγ2V82+T細胞也顯著增加，但抗原特異性CD4+及CD8+細胞則無明顯變化。結(jié)論：HMBPP+IL-2不僅在體外可特異性刺激Vγ2V82+T細胞的增殖活化，還可以在動物體內(nèi)特異性刺激外周血及局部組織的Vγ2V62+T細胞數(shù)量激增、功能活化，因此使對機體Vγ2Vδ2+T細胞進行人工調(diào)控成為可能。 第

6、三部分、分枝桿菌感染的免疫治療研究 目的：探討靈長類動物分枝桿菌感染模型接受免疫治療的效果。方法：以靈長類動物為模型，將實驗動物分為四組：對照組、ostim組、IL-2組和Picostim+IL-2組。對所有動物采用靜脈注射的方式感染BCG，然后根據(jù)分組對相應的實驗動物給予Picostim和/或IL-2治療。在不同時間點抽取實驗動物的外周血，并進行支氣管肺泡灌洗得到BAL液。采用全血染色、BAL液細胞染色、分離PBL、ELISP

7、OT、ICS及外周血BCG CFU計數(shù)等方法，對實驗動物的T淋巴細胞數(shù)量和功能進行了全面分析，評價Picostim和/或IL-2的治療效果。結(jié)果：與對照組相比，實驗動物在感染BCG并接受相應治療后，其外周血和局部組織中的CD3+CD4+和CD3+CD8+T細胞的數(shù)量、亞群分布及功能反應變化均不明顯。而Picostim+IL-2組實驗動物外周血和局部組織中Vγ2V/52+T細胞數(shù)量在治療后第四天即出現(xiàn)明顯增加，并可持續(xù)長達六周以上。更為重

8、要的是，與對照組相比，Picostim+IL-2組Vγ2V62+T細胞EM亞群升高明顯，且出現(xiàn)時間早，于第四天即達高峰。而且其PBL經(jīng)HMBPP刺激后，分泌IFN-γ和Perforin的能力均大大加強，且高峰較對照組提前，而且外周血中BCG CFU計數(shù)也較其他組為低。結(jié)論Picostim和IL-2同時給藥，無論對Vγ2Vδ2+T細胞的表型還是功能均產(chǎn)生了極其顯著的影響，使實驗動物Vγ2Vδ2+T細胞對抗原的反應強度增大，出現(xiàn)時間提前，且