吡格列酮衍生物對小鼠3T3-L1細胞細胞功能的影響.pdf

1、目的:為了進一步增強胰島素增敏劑的療效，同時降低其藥物副作用，以吡格列酮(pioglitazone)化學結構為基礎開發(fā)了吡格列酮衍生物(CQMUHS-03)。本課題以小鼠3T3-L1細胞為依托，觀察CQMUHS-03對3T3-L1細胞增殖的抑制作用及對誘導分化的影響，并初步討論其可能的機制，為CQMUHS-03在Ⅱ型糖尿病中的治療應用提供理論基礎。
　　 方法:(1)分別用含不同濃度(1×10-8mol/L～1×10-4mol/

2、L)藥物的細胞培養(yǎng)液進行3T3-L1前脂肪細胞培養(yǎng)，于24、48、72h采用MTT法檢測藥物對3T3-L1前脂肪細胞增殖的影響。(2)建立3T3-L1細胞誘導分化模型，并在誘導0天時即加入不同濃度的藥物，分別于誘導分化的2、4、6、8天收集細胞，進行油紅O染色，拍攝照片并測定570nm處光密度(OD)值，尋找有效的藥物干預濃度。(3)誘導3T3-L1細胞分化，并在誘導0天時即加入藥物，待分化成熟，提取細胞總RNA，Real-time P

3、CR分析PPARγ基因表達。(4)誘導3T3-L1細胞分化，同時加入藥物分別作用2、4、6、8天收集細胞，采用Western Blot方法測定藥物對PPARγ蛋白表達的影響。
　　 結果:(1)通過24、48、72h的MTT檢測，結果顯示CQMUHS-03對3T3-L1細胞生長抑制作用呈劑量和時間依賴性。通過中效方程計算72h時CQMUHS-03的IC50值為3.33×10-4 mol/L，吡格列酮IC50值為2.91×10-4

4、 mol/L。與陰性對照組相比1×10-4，1×10-5mol/L濃度的CQMUHS-03對細胞抑制作用較強，存活率低，組間有顯著性差異(P＜0.05)。與陰性對照組相比1×10-4，1×10-5，1×10-6mol/L濃度的吡格列酮，對細胞有抑制作用，組間有顯著性差異(P＜0.05)。CQMUHS-03與吡格列酮組比較，1×10-5，1×10-6，1×10-7mol/L濃度時存活率高于吡格列酮組，組間有顯著性差異(P＜0.05)。(2

5、)油紅O染色測定結果顯示吡格列酮各濃度均促進3T3-L1前脂肪細胞的分化，在誘導分化的2、4、6、8天油紅染色提取法所測得OD值均比陰性對照組高，其中1×10-5，1×10-6mol/L濃度的促分化作用有顯著性(P＜0.05)。相對的，CQMUHS-03對3T3-L1前脂肪細胞的分化促進作用不明顯，相對于陰性對照組，誘導第2、4、8天兩者無顯著性差異。第6天時，僅1×10-6mol/L濃度的促進作用相對于陰性對照有顯著性差異(P＜0.0

6、5)。CQMUHS-03與吡格列酮相比促分化作用弱，在1×10-6、1×10-7mol/L濃度時2、4、6、8天所測得的OD值均顯示有顯著性差異(P＜0.05)。(3) Real Time-PCR檢測顯示誘導分化8天，吡格列酮組PPARmRNA表達上調5.12倍，CQMUHS-03組PPARγmRNA表達上調2.29倍，與陰性對照組相比組間有明顯差異(P＜0.05)，且CQMUHS-03的上調作用顯著低于吡格列酮(P＜0.05)。(4)

7、在3T3-L1細胞誘導分化的2、4、6、8天，Western blot測定PPARγ蛋白表達。結果顯示隨著誘導分化時間的增加，PPARγ蛋白表達先增加后降低。CQMUHS-03相比于陰性對照組，PPARγ的表達增高，組間有顯著性差異(P＜0.05)。同時，CQMUHS-03與吡格列酮相比，2、4、6天測定的蛋白表達量較低，組間有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 結論:(1) CQMUHS-03在1×10-6mol/L濃度以下對

8、3T3-L1細胞毒性較小，對正常前脂肪細胞增殖無明顯抑制， IC50值為3.33×10-4mol/L，相對于吡格列酮（IC50為2.91×10-4 mol/L）毒性較小。
　　 (2) CQMUHS-03對3T3-L1細胞促分化作用較弱，并且明顯弱于吡格列酮的促分化作用。
　　 (3) CQMUHS-03明顯上調3T3-L1細胞分化過程中PPARγmRNA的表達，但弱于吡格列酮的上調作用。
　　 (4) CQMU