肌肉生長抑素對小鼠前脂肪細胞3T3-L1增殖和分化的影響.pdf

1、目的:
　　 肥胖是目前人類健康所面臨的最大挑戰(zhàn)之一，其核心病理生理過程是能量攝入與消耗之間的不平衡，導致過剩的能量以脂肪形式在體內堆積。脂肪細胞數量增多和體積增大是機體脂肪組織增加的根本途徑，因而受到了研究者廣泛的關注。肌肉生長抑素(myostatin，MSTN)因其對骨骼肌生長的強烈負性調節(jié)作用于1997年被發(fā)現，此后又發(fā)現其與脂代謝亦存在密切關系:多項體內實驗提示MSTN功能缺失具有抗脂肪形成的作用；體外細胞水平的研究則提

2、示，MSTN抑制前脂肪細胞的分化，使其脂質累積減少，但對前脂肪細胞的增殖有無影響，對前脂肪細胞分化的可能的作用靶點是什么？目前國內外尚無相關報道。所以本研究旨在探討MSTN對小鼠前脂肪細胞3T3-L1增殖及分化的影響，并尋找可能的作用靶點。
　　 方法:
　　 1.MSTN對小鼠前脂肪細胞3T3-L1增殖的影響:
　　 以AIMV無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)3T3-L1細胞，使其自然增殖，于增殖第3天起以不同濃度(0～6.4

3、nM) MSTN作用于增殖中的3T3-L1細胞，之后每24小時以MTT法觀察細胞增殖情況；
　　 2.MSTN對小鼠前脂肪細胞3T3-L1分化的影響:
　　 2.1.采用含胰島素、地塞米松與IBMX的分化培養(yǎng)基誘導分化3T3-L1細胞，于誘導分化第8天起以不同濃度(0～20nM)MSTN作用于分化中的3T3-L1細胞，此后每3天以油紅O染色并染料提取的半定量方法及細胞內甘油三酯測定的方法了解細胞內脂質含量，從而觀察MST

4、N對3T3-L1細胞分化的影響。
　　 2.2.3T3-L1細胞誘導分化8天后加入不同濃度(0及20nM) MSTN，作用3天后收集細胞提取總RNA并逆轉錄為cDNA，采用實時熒光定量RT-PCR的方法對維持分化相關轉錄因子(PPARγ及CEBPα)、脂代謝關鍵酶(LPL、ACC1、ACS1、FAS、GPDH、DGAT、HSL、ATGL及CPT1)及脂肪因子(leptin、adiponectin、resistin、visfati

5、n及PAI-1)mRNA表達水平進行檢測，尋找MSTN影響3T3-L1細胞分化的可能作用靶點。
　　 結果:
　　 1.MSTN對小鼠前脂肪細胞3T3-L1增殖的影響:
　　 1.1.0.025nMMSTN抑制3T3-L1細胞的增殖，持續(xù)作用至24小時該作用達到峰值(OD值為對照組89.6±8.3％，p<0.01)，抑制作用隨持續(xù)作用時間的延長而減弱，至96小時該作用消失(OD值為對照組101.7±8.8％，p=

6、1.00)。
　　 1.2.0.2～6.4nM MSTN促進3T3-L1細胞的增殖，該作用具有劑量及時間依賴性，最大促進作用可于3.2nM達到(96小時OD值為對照組187.0±14.7％，p<0.01)，進一步提高MSTN濃度不能使其刺激增殖的效應繼續(xù)放大(6.4nM MSTN在96小時OD值為對照組188.0±16.1％，p<0.01；但與3.2nM MSTN組相比，兩組的差異無統(tǒng)計學意義，p=1.00)。
　　 2

7、.MSTN對小鼠前脂肪細胞3T3-L1分化的影響:
　　 2.1.油紅O染色半定量法及甘油三脂測定法均提示MSTN對3T3-L1細胞的分化具有抑制作用，該抑制作用隨MSTN持續(xù)作用時間的延長而增強。至MSTN持續(xù)作用第6天，油紅O染色半定量法測定SnM MSTN組OD值為對照組59.8±11.6％，p<0.01:甘油三酯測定法5nM及10nM MSTN組甘油三酯含量分別為對照組90.6±4.9％及70.4±6.8％，p<0.01

8、。
　　 2.2.3T3-L1細胞誘導分化8天，以10nM的MSTN作用3天后，與未加藥組相比，維持分化的轉錄因子PPARγ及CEBPa mRNA相對表達量顯著降低(分別為對照組60.2±5.8％，p<0.01及78.3±18.4％，p<0.05)；脂肪合成關鍵酶LPL、ACS1、GPDH及DGAT mRNA相對表達量顯著降低(分別為對照組52.4±9.4％、75.7±12.0％、56.9±2.4％及58.2γ11.6％ p<0

9、.01)，而ACC1及FASmRNA相對表達量輕度下降但結果不具有統(tǒng)計學意義(分別為對照組93.8±15.6％ p＝0.589及92.2±16.0％p=0.449):脂肪分解關鍵酶HSL及ATGLmRNA相對表達量顯著降低(分為對照組75.8±7.4％及43.1±8.3％，p<0.01)而CPT1mRNA相對表達量顯著升高(為對照組117.2±9.7％，p<0.01)；脂肪因子leptin mRNA相對表達量無明顯變化(為對照組117.

10、2±9.7％，p<0.01)，adiponectin、resistin、visfatin mRNA相對表達量顯著降低(分別為對照組60.8±6.0％、29.6±1.6％及47.7±2.5％，p<0.01)而PAl-1 mRNA相對表達量極顯著升高(為對照組986.8±116.7％，p<0.01)。
　　 結論:
　　 1.肌肉生長抑素對小鼠前脂肪細胞3T3-L1增殖的影響:肌肉生長抑素在低濃度時輕度抑制3T3-L1細胞的