植物乳桿菌素PZJ008的鑒定、純化及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目前，中國(guó)仍然是一個(gè)大量使用化學(xué)防腐劑的國(guó)家，隨著人們對(duì)化學(xué)防腐劑危害的認(rèn)識(shí)不斷提高，我們開(kāi)始尋找一種安全的天然防腐劑代替化學(xué)防腐劑。Nisin是得到全球安全認(rèn)可的天然食品防腐劑，但Nisin只對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有抑制作用，因此，對(duì)其他種類(lèi)細(xì)菌素進(jìn)行純化和特性研究顯得非常重要。本實(shí)驗(yàn)室從新鮮生奶中分離得到一株有抑菌活性的乳酸菌，對(duì)其進(jìn)行一系列研究，主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　(1)經(jīng)生理生化實(shí)驗(yàn)鑒定及16S rDNA基因序列的分析，我們將

2、這株乳酸菌命名為植物乳桿菌ZJ008，其產(chǎn)生的細(xì)菌素為植物乳桿菌素ZJ008，簡(jiǎn)稱(chēng)PZJ008。
　　(2)細(xì)菌素一般是帶正電荷、具有高度疏水性的小肽，根據(jù)這些特性和實(shí)驗(yàn)室設(shè)備條件設(shè)計(jì)了分離純化三步法:①利用XAD-2大孔樹(shù)脂粗分，收集有活性洗脫液（70％洗脫液），濃縮;并通過(guò)SDS-PAGE蛋白電泳分析得知細(xì)菌素PZJ008的分子量在4.0 kDa以下;②用SP強(qiáng)陽(yáng)離子柱純化，并用Superdex PP分子篩進(jìn)一步分離;③用C1

3、8柱反相高效液相色譜得到高純度的細(xì)菌素，進(jìn)行質(zhì)譜分析得知PZJ008的分子量是2612.4 Da。
　　(3)通過(guò)對(duì)細(xì)菌素PZJ008生化性質(zhì)的研究發(fā)現(xiàn)該細(xì)菌素在pH4-5之間的酸性條件下抑菌性最強(qiáng)，當(dāng)pH＞8時(shí)，PZJ008的抑菌活性幾乎完全喪失。在不同溫度中處理30 min，PZJ008(pH4.5)仍保持良好活性，說(shuō)明該細(xì)菌素的熱穩(wěn)定較好。細(xì)菌素PZJ008對(duì)胰蛋白酶、胃蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶敏感，而對(duì)蛋白酶K

4、、溶菌酶、脂肪酶、核糖核酸酶A、α-淀粉酶不敏感。
　　(4)通過(guò)對(duì)PZJ008抑菌譜的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)PZJ008的抑菌譜很廣，不僅對(duì)金黃色葡萄球菌、肉葡萄球菌、單增李斯特菌、檸檬色葡萄球菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌等革蘭氏陽(yáng)性菌有很強(qiáng)的抑菌效果，對(duì)大腸桿菌、銅綠假單胞菌等革蘭氏陰性菌也有抑菌作用。最小抑菌試驗(yàn)證明檸檬色葡萄球菌對(duì)PZJ008最敏感，MIC是33.1 IU/mL。
　　(5)通過(guò)細(xì)菌素對(duì)指示菌作用的研究以及胞外K