超聲微泡造影劑聯(lián)合脂質體介導pNogo-R shRNA轉染神經干細胞的體外實驗研究.pdf

1、第一部分
　　 超聲微泡介導pGPU6/Neo質粒轉染神經干細胞參數優(yōu)化的實驗研究
　　 目的:探討超聲微泡介導pGPU6/Neo質粒轉染大鼠NSCs的最優(yōu)參數。
　　 方法:以一定能量的超聲介導質粒轉染大鼠NSCs,分為:空白組、pGPU6/Neo質粒組、pGPU6/Neo質粒+微泡組、pGPU6/Neo質粒+超聲組、pGPU6/Neo質粒+微泡+超聲組,并按不同轉染條件分為亞組。轉染48h后熒光顯微鏡觀察轉染

2、效率,臺盼藍染色法檢測細胞活性。
　　 結果:最優(yōu)參數為聲強1.0W/cm2,輻照時間30s時,超聲微泡介導質粒轉染率最高,且對細胞活性無明顯影響。超聲微泡介導質粒對NSCs的轉染效率,明顯高于其他實驗組(P＜0.05)。
　　 結論:在超聲聲強為1.0W/cm2,輻照時間30s的條件下,超聲微泡造影劑能夠安全、有效地介導基因轉染NSCs。
　　 第二部分
　　 超聲微泡造影劑聯(lián)合脂質體介導pNogo-R

3、 shRNA轉染神經干細胞的實驗研究
　　 目的:探討超聲微泡介導pNogo-R shRNA轉染大鼠NSCs的有效率及可行性,同時評估UMMD聯(lián)合脂質體提高基因轉染效率的協(xié)同作用。
　　 方法:NSCs自清潔級SD新生大鼠分離獲得,以不同的方式轉染培養(yǎng)至第三代的NSCs,分為:A.空白組、B.陰性質粒+超聲微泡組、C.pNogo-R shRNA質粒+超聲微泡組、D.pNogo-R shRNA質粒+脂質體組、E.pNogo

4、-R shRNA質粒+超聲微泡+脂質體組。
　　 結果:熒光顯微鏡觀測結果顯示,E組轉染效率明顯高于其他實驗組,而C組與D組間無顯著差異;同時,臺盼藍染色法顯示,與其他組相比較,超聲微泡聯(lián)合脂質體組對細胞活性影響無顯著差異;轉染24小時后,E組Nogo-R的蛋白及mRNA表達水平明顯低于其他組別(P＜0.05),差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:本研究結果表明,超聲微泡聯(lián)合脂質體的基因轉染為一非侵襲性轉染方法,對細胞活性