基底靜態(tài)拉伸對成肌纖維細胞分化的影響.pdf

1、成肌纖維細胞(Myofibroblast)是一種多起源的異質(zhì)性細胞，在愈傷反應(wound-healing response)中扮演十分重要角色，參與體內(nèi)多種器官的纖維化進程，包括：肝纖維化，肺纖維化，腎纖維化，動脈粥樣硬化，組織粘連，疤組織形成。體內(nèi)多種細胞都具有分化或去分化成為成肌纖維細胞的潛力，如肝星狀細胞，血管平滑肌細胞，內(nèi)皮細胞等，越來越多的研究研究表明，胞外基質(zhì)硬度和細胞骨架的收縮力在成肌纖維細胞分化過程中起著十分關鍵的調(diào)控

2、作用。本文在成肌纖維細胞受到不同的基底拉力的情況下，應用蛋白印跡和免疫熒光法鑒的方法對成肌纖維細胞分化過程的變化進行初步探究。
　　 主要研究工作和結果如下：
　　 (1)機械拉伸加載裝置的加工制作
　　 根據(jù)基底膜形變原理，自行研制了單軸細胞拉伸裝置?？梢詽M足不同幅度的靜態(tài)拉伸。
　　 (2)成肌纖維細胞的獲得與鑒定
　　 對兔子進行腹腔手術，將雞蛋蛋白切成小塊植入兔子腹腔，然后手術縫合飼養(yǎng)，然

3、后根據(jù)實驗設計的不同時間，解剖兔子腹腔，取出蛋白塊，并用膠原酶消化過濾.獲得不同分化階段細胞。經(jīng)過蛋白印跡和免疫熒光法鑒定所獲細胞，α-SM-actin為陽性，證明該細胞為成肌纖維細胞。因此可以利用該方法獲取的細胞進行進一步的研究。
　　 (3)對獲取的不同階段的成肌纖維細胞進行研究，掌握成肌纖維細胞分化的過程
　　 對實驗動物新西蘭兔進行手術，植入的蛋白塊，分別飼養(yǎng)三天，五天，七天，十天，十五天，然后取出蛋白塊消化獲取

4、細胞，分別種在硅膠膜上，在培養(yǎng)40小時后進行免疫熒光觀察，發(fā)現(xiàn)在三天沒有成肌纖維細胞表達的平滑肌肌動蛋白(α-SM-actin)，在五天的成肌纖維細胞表達了平滑肌肌動蛋白(α-SM-actin)，因此我們認為在五天時成肌纖維細胞已經(jīng)開始分化，同時我們對五天，七天，十天，十五天的細胞進行熒光強度檢測，還發(fā)現(xiàn)在七天時表達了平滑肌肌動蛋白(α-SM-actin)有所下降，而后隨著分化天數(shù)的增加而增加，這表明在成肌纖維細胞的分化過程中可能有一個

5、回調(diào)機制。
　　 (4)對分化起始階段的細胞進行基底靜態(tài)拉伸
　　 選取了五天和七天的細胞對其進行基底靜態(tài)拉伸，通過多次預試驗和相關參考文獻我決定采用施加3％和6％的拉力。通過免疫熒光檢測，發(fā)現(xiàn)五天階段成肌纖維細胞的對照、0-3％-6％拉伸、6％拉伸的熒光均值依次為238773.9±179214、385940.2士260968.3、355673.3士263254.2。七天階段成肌纖維細胞對照、0-3％-6％拉伸、6％拉伸