Notch信號通路在心肌成纖維細胞向肌成纖維細胞轉分化中的作用.pdf

1、【研究背景】
　　心肌成纖維細胞（CFs）過度增殖、轉分化為肌成纖維細胞(MFB)而表達α-平滑肌肌動蛋白（α-smoothmuscleactin，α-SMA）導致膠原合成分泌過多是心肌纖維化的重要病理基礎。轉化生長因子-β1（TGF-β1）具有促進CFs向MFB轉分化，上調α-SMA和促進膠原合成等作用，是重要的促心肌纖維化細胞因子。心臟中腎素-血管緊張素系統(tǒng)(rennin-angiotensinsystem,RAS)的主要產(chǎn)物

2、血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)也能促進心肌纖維化的形成。Notch信號通路通過受體與配體相互作用來精確調控細胞分化，在心血管發(fā)育生理、病理過程中起重要作用，已證實其參與調節(jié)了成纖維細胞向MFB的分化，但其在CFs向MFB轉分化過程中作用如何尚缺乏明確報道。
　　【研究目的】
　　1.觀察基礎狀態(tài)下CFs表達Notch各受體情況以及DAPT對CFs的α-SMA，HYP的作用，初步闡明Notch通路是否參與心

3、肌纖維化。
　　2.明確TGF-β1誘導CFs的α-SMA、HYP變化過程中Notch各受體的變化情況。
　　3.明確AngⅡ誘導CFs的α-SMA、HYP變化過程中Notch各受體的變化情況。
　　【研究內容】
　　1.檢測基礎狀態(tài)下CFs表達Notch各受體情況以及分別使用DAPT不同作用濃度和不同作用時間對CFs的α-SMA、HYP的影響：分別采用實時定量PCR和蛋白印跡的方法檢測Notch各受體的基因和蛋

4、白水平；采用免疫熒光細胞化學和蛋白印跡的方法檢測α-SMA的表達；采用消化法測定HYP含量。
　　2.TGF-β1不同作用時間和作用濃度對CFs的α-SMA、HYP的影響以及在TGF-β1誘導CFs向MFB轉分化中Notch各受體的表達變化：采用免疫熒光細胞化學和蛋白印跡的方法檢測α-SMA的表達；采用消化法測定HYP含量；采用實時熒光定量PCR和蛋白印跡的方法檢測Notch各受體的基因和蛋白水平。
　　3.AngⅡ不同作用

5、時間和作用濃度對CFs的α-SMA、HYP的影響以及在AngⅡ誘導CFs向MFB轉分化中Notch各受體的表達變化：采用免疫熒光細胞化學和蛋白印跡的方法檢測α-SMA的表達；采用消化法測定HYP含量；采用實時熒光定量PCR和蛋白印跡的方法檢測Notch各受體的基因和蛋白水平。
　　【研究結果】
　　1.基礎狀態(tài)下CFs有Notch各受體基因和蛋白的表達；隨著DAPT作用濃度的增加和作用時間的延長CFs的α-SMA、HYP均呈

6、遞增趨勢。
　　2.TGF-β1可以上調CFs的α-SMA、HYP表達量，隨著TGF-β1作用濃度的增加和作用時間的延長α-SMA、HYP均呈遞增趨勢。但Notch1、Notch3、Notch4隨著TGF-β1作用時間的延長呈遞減趨勢，Notch2則無明顯變化。
　　3.AngⅡ可以上調CFs的α-SMA、HYP表達量，隨著AngⅡ作用濃度的增加和作用時間的延長α-SMA、HYP均呈遞增趨勢。但Notch1、Notch3、N

7、otch4隨著AngⅡ作用時間的延長呈遞減趨勢，Notch2表達則無明顯變化。
　　【研究結論】
　　1.Notch各受體基因和蛋白在基礎狀態(tài)下CFs上均有表達。DAPT阻斷Notch通路后，可以引起α-SMA、HYP的增加，導致CFs向MFB發(fā)生轉分化。Notch通路在CFs向MFB轉分化過程中可能具有重要作用。
　　2.TGF-β1能夠顯著增加CFsα-SMA、HYP的表達量，并且呈時間和劑量依賴效應，可以誘導CF