超聲聯(lián)合聲諾維微泡介導(dǎo)wtp53基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的腫瘤,約占顱內(nèi)腫瘤的40%-60%。由于其侵襲特性及由低級(jí)別向高級(jí)別轉(zhuǎn)化的趨勢(shì),使得手術(shù)治療難以根治腫瘤,且放療和化療效果不佳,術(shù)后復(fù)發(fā)率高,預(yù)后差,死亡率高。而癌基因、抑癌基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要作用,其中原癌基因的激活與抑癌基因的失活使其對(duì)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)失控。野生型p53(wtp53)作為一種常見(jiàn)的抑癌基因,其主要生物學(xué)功能是通過(guò)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞周期及誘

2、導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)維持細(xì)胞基因組的穩(wěn)定性,從而抑制腫瘤的發(fā)生。本文旨在探討超聲靶向破壞微泡(UTMD)技術(shù)增強(qiáng)wtp53基因轉(zhuǎn)染鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞的可行性,同時(shí)對(duì)該轉(zhuǎn)染體系的微泡濃度、質(zhì)粒濃度等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。
  方法:
  將體外培養(yǎng)的鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞懸液分為空白對(duì)照組、質(zhì)粒+超聲組、質(zhì)粒+微泡組、超聲+微泡組、質(zhì)粒+超聲+微泡組;并將質(zhì)粒+超聲+微泡組按微泡濃度分為5%、10%、20%、30%、40%;再按質(zhì)粒濃度分為5μg/m

3、l、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、30μg/ml。輻照條件:采用頻率1MHz、聲強(qiáng)0.8W/cm2、占空比20%、持續(xù)時(shí)間50s。在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24h-48h,用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染率、臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞存活率、逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞中的wtp53mRNA表達(dá)量、流式細(xì)胞儀檢測(cè)C6細(xì)胞凋亡百分比及細(xì)胞周期分布。
  結(jié)果:
  1、微泡濃度為20%、30%時(shí),細(xì)胞

4、轉(zhuǎn)染效率較高,但微泡濃度為30%的C6細(xì)胞存活率比微泡濃度為20%的降低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
  質(zhì)粒濃度為15μg/ml時(shí),細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率最高(P<0.05),而C6細(xì)胞存活率有所下降(P<0.05);質(zhì)粒濃度為20μg/ml、30μg/ml時(shí)細(xì)胞存活率顯著下降(P<0.01)。
  因此,微泡濃度20%、質(zhì)粒濃度15μg/ml為該轉(zhuǎn)染體系最佳參數(shù)。
  2、UTMD作為一種安全有效的轉(zhuǎn)染方法,目的基因可

5、以在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá),并發(fā)揮其相關(guān)效應(yīng)。
  超聲+微泡組的細(xì)胞存活率與其他組相比(除質(zhì)粒+超聲+微泡組),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  與其他組比較,質(zhì)粒+超聲+微泡組細(xì)胞存活率的降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);質(zhì)粒+微泡+超聲組的轉(zhuǎn)染效率最高,轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的wtp53mRNA的表達(dá)量增多,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡百分比明顯增高,細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞數(shù)增多(P<0.05)。
  結(jié)論:
  UTMD可

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