空腸彎曲菌鞭毛輸出系統(tǒng)關鍵基因flhA突變株的構建及其功能的初步研究.pdf

1、lS38356行的研究工作及取謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含本人為獲得江南大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。工簽名：連墨壘日期：互!!呈：!!!翌關于論文使用授權的說明本學位論文作者完全了解江南大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定：江南大學有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以

2、將學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文，并且本人電子文檔的內容和紙質論文的內容相一致。保密的學位論文在解密后也遵守此規(guī)定。簽名：甚墨墨導師簽名：日期：塑墨摘要1_●_1口尸空腸彎曲菌(Campylobacterjejuni)為微需氧、無芽孢的革蘭氏陰性彎曲短桿菌，是全球范圍內人類感染性腹瀉常見的食源性病原菌。鞭毛不僅是其運動器官，更是主要的毒力因子，在Cjejuni黏附、定

3、殖、侵入腸上皮細胞以及毒力蛋白分泌外輸過程中起重要作用。鞭毛輸出系統(tǒng)是鞭毛合成、裝配以及功能表現(xiàn)重要的結構基礎，大部分研究認為鞭毛輸出系統(tǒng)與革蘭氏陰性細菌的Ⅲ型毒力蛋白分泌系統(tǒng)在進化上是同源的，基因組分析以及相關的實驗研究初步顯示，鞭毛輸出系統(tǒng)很可能承擔了CjejuniIII型毒力蛋白的轉運功能，與Cjejuni鞭毛致病性密切有關。為了深入探索鞭毛輸出系統(tǒng)與鞭毛合成以及致病性關聯(lián)的分子機制，本課題運用分子生物學手段構建了Cjejuni鞭

4、毛輸出系統(tǒng)關鍵基因flhA突變株(HXW001)，并初步研究了flhA在毒力和分子調控方面的功能。1、flhA插入失活突變株HXW001的構建與鑒定本研究使用插入失活的方法構建空腸彎曲菌flhA突變株，首先在EcoilJMl09中構建敲除載體pMDl9TflhAkan“。其次，使用電轉化的方法將其導入到空腸彎曲菌中，利用同源重組獲得突變株HXW001。2、突變株致病相關表型的初步研究主要包括生長性能、運動能力、菌體結構、自身凝集性(Au

5、toagglutination)、菌膜形成能力等，初步解析CjejuniflhA與毒力的相關性。結果表明，flhA的缺失，對菌體的生長性能并無明顯影響，但是HXW001菌株的鞭毛缺失且喪失運動能力，生物膜形成能力和自身凝集現(xiàn)象明顯下降，說明flhA是鞭毛結構和致病性重要的分子基礎。3、rThA對鞭毛合成調節(jié)功能的初步研究通過熒光定量PCR的方法研究了flhA對主要鞭毛絲蛋白基因tTaA、調節(jié)基因刀謝(o28)和rpoN(o54)在轉錄水

6、平上的調節(jié)功能，結果顯示，tTha的缺失降低了鞭毛結構基因flea和鞭毛合成第三級調節(jié)基因∥謝的轉錄，對鞭毛合成第二級調節(jié)基因rpoN并無明顯的影響，表明，z枷不僅與鞭毛蛋白輸出有關，而且對鞭毛絲蛋白及其調節(jié)因子具有轉錄水平的調控能力。4、tTha與ⅡI型毒力蛋白胞內表達和胞外分泌相關性初步研究首先通過熒光定量PCR的方法研究J“flhA對Ⅲ型毒力蛋白基因ciaB在胞內轉錄水平的影響，結果表明，17ha并不影響III型毒力蛋白基因cia