犬根尖牙乳頭干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：416524012303南昌大學專業(yè)學位研究生南昌大學專業(yè)學位研究生學位論文犬根尖牙乳頭干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定犬根尖牙乳頭干細胞的分離培養(yǎng)及鑒定Isolationcultivationidentificationofstemcellfromapicalpapillaofcanine賀露培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學附屬口腔醫(yī)院指導教師姓名、職稱：楊健主任醫(yī)師教授專業(yè)學位種類：口腔醫(yī)學碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱：口腔醫(yī)學論

2、文答辯日期：2015年6月答辯委員會主席：評閱人：2015年6月摘要II摘要目的目的采用組織塊培養(yǎng)法從犬年輕恒牙根尖牙乳頭組織中分離培養(yǎng)出根尖牙乳頭干細胞（stemcellfromapicalpapilla，SCAP)，探索其自我更新和多向分化能力，為SCAP的進一步研究應用奠定基礎。方法方法拔除犬健康年輕恒牙獲取根尖牙乳頭組織，采用組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)犬根尖牙乳頭細胞，詳細觀察、記錄細胞的形態(tài)和生長特性；流式細胞術(shù)鑒定干細胞表面標記物

3、；進行平板克隆形成實驗；細胞免疫熒光鑒定胞漿蛋白；體外進行成骨、成脂誘導分化及鑒定。結(jié)果結(jié)果采用組織塊培養(yǎng)法可從根尖牙乳頭組織中分離培養(yǎng)出貼壁的短梭形或星形的成纖維樣細胞，自我增殖能力強，克隆成形率為（116.8312.608）600非常高。間充質(zhì)干細胞表面標記分子STRO1、CD90、CD24表達陽性，但是CD34表達陰性。胞漿中巢蛋白（Nestin），波形蛋白（Vimentin）表達陽性、牙本質(zhì)涎蛋白（dentinsialoprot

4、ein，DSP）表達陰性或極弱陽性。成骨誘導分化后可見礦化結(jié)節(jié)，堿性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP），DSP表達陽性，成脂誘導分化后形成脂滴；誘導分化后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（reversetranionpolymerasechainreaction，RTPCR)分析表明特征性分化標記分子骨唾蛋白（bonesialoproteinBSP）、DSP、RUNX2、脂蛋白脂酶（lipoproteinlipase，LPL）