蛋氨酸腺苷轉移酶2B在肝癌組織中的表達及對肝癌細胞增殖的調控作用研究.pdf

1、肝細胞性肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是一種常見的病死率極高的惡性腫瘤。每年新發(fā)病例及死亡病例約有一半都是在中國。雖然外科手術治療的進步延長了部分早期患者的生存期，但多數(shù)患者就診時已處于晚期，缺乏手術治療指證，而對傳統(tǒng)的化療藥物及放療亦不夠敏感。因此，目前亟需解決的問題在于開辟新的研究方向，積極尋找新的有效治療靶點。
　　HCC的發(fā)生是一個伴有慢性肝損傷的長期過程，該過程中通常伴隨很多代謝異常，其

2、中就包括S-腺苷蛋氨酸(S-Adenosylmethionine，SAM)。SAM是體內重要的蛋氨酸代謝產物和唯一的甲基供體，參與體內很多重要的甲基轉移過程，其合成和代謝過程都主要發(fā)現(xiàn)在肝臟。近年來腫瘤細胞代謝和表觀遺傳學都是熱點，如何逆轉腫瘤細胞的異常代謝和甲基化修飾過程也成為新的治療靶點，已有相關藥物問市。SAM穩(wěn)態(tài)對維持正常肝細胞的代謝和甲基化修飾過程都至關重要，調節(jié)維持SAM穩(wěn)態(tài)有希望成為不同于傳統(tǒng)化療藥物的肝癌治療新方向。

3、r>　　蛋氨酸腺苷轉移酶(Methionine Adenosyltransferase，MAT)是催化形成SAM的關鍵酶，SAM穩(wěn)態(tài)失衡與MAT類型轉換和活性降低有關。MAT2B基因屬于MAT家族成員之一，編碼產生β調節(jié)亞基，通過降低SAM的Ki值和蛋氨酸的Km值來調控MATⅡ的活性，從而影響體內SAM含量。正常肝細胞中該基因表達量極低，但是當肝臟發(fā)生慢性病變或者癌變時其表達明顯上調，從而影響體內SAM穩(wěn)態(tài)，并參與調控腫瘤細胞生長和凋亡

4、等過程。更為重要的是，我們前期研究還發(fā)現(xiàn)在小鼠體內將轉座子插入該基因后，MAT2B蛋白表達上調，最終引發(fā)HCC的產生。
　　本研究希望通過體內體外多層次實驗進一步探討和闡明MAT2B在HCC進展中的作用，包括在細胞水平對細胞增殖和遷移的影響，以及在動物模型中對腫瘤生長的影響以及與臨床肝癌患者預后關系。主要結果如下:
　　1.MAT2B蛋白在肝癌組織中與癌旁組織相比表達量明顯上調，并且與腫瘤大小和患者臨床預后有顯著關系。

5、>　　2.CCK-8、結晶紫染色發(fā)現(xiàn)干擾MAT2B能明顯抑制HepG2、HCCLM6細胞的增殖作用，流式細胞學檢測周期發(fā)現(xiàn)干擾組出現(xiàn)明顯的S-期積聚，裸鼠皮下成瘤實驗也進一步證實了下調MAT2B在體內也能明顯抑制腫瘤生長，Western-Blot發(fā)現(xiàn)抑制增殖作用可能與p-AKT、p-p38MAPK表達下調及p21、p27積聚有關。
　　3.細胞劃痕實驗、Transwell發(fā)現(xiàn)干擾MAT2B能顯著抑制HepG2、HCCLM6細胞的遷