蛋白酪氨酸磷酸酶-PEST促進HepG2肝癌細胞增殖作用的研究.pdf

1、目的:本研究通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)建立PTP-PEST穩(wěn)定高表達的HepG2細胞株,利用RT-PCR、實時熒光定量PCR、蛋白免疫印跡技術(shù)對穩(wěn)定高表達PTP-PEST的HepG2細胞內(nèi)相關(guān)基因和蛋白進行分析,MTT法觀測不同HepG2細胞株的增殖速率,初步探討PTP-PEST對肝癌細胞增殖的影響以及可能涉及的信號傳導網(wǎng)絡(luò)。
　　 方法:
　　 1.構(gòu)建PTP-PEST真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1/PTP-PEST,并和空載體

2、pcDNA3.1分別轉(zhuǎn)染HepG2細胞,G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞克隆。
　　 2.用RT-PCR和實時熒光定量法檢測PTP-PEST的mRNA含量,Western Blot篩選PTP-PEST蛋白表達改變的穩(wěn)定細胞轉(zhuǎn)染株。
　　 3.應(yīng)用Real-time PCR、Western Blot及MTT法觀察高表達PTP-PEST對HepG2細胞內(nèi)相關(guān)基因表達量的影響以及HepG2細胞體外增殖能力的改變。
　　 結(jié)果:

3、
　　 1.RT-PCR、實時熒光定量PCR和Western Blot實驗結(jié)果表明,PTP-PEST穩(wěn)定高表達的HepG2肝癌細胞株已經(jīng)建立。
　　 2.PTP-PEST對HepG2肝癌細胞的影訂向:@PTP-PEST使細胞增殖速度加快；②PTP-PEST促進了細胞內(nèi)Ras、Grb2和PSTPIP基因水平的上調(diào),并在蛋白水平驗證了Grb2表達升高。
　　 結(jié)論:
　　 1.成功構(gòu)建PTP-PEST高表達H