

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、必特螺旋霉素(Bitespiramycin,BT)已完成Ⅲ期臨床試驗,4"位的異戊?;梢栽黾悠浣M織濃度和體內抗菌活性,延長抗生素的半衰期,臨床研究結果表明,對上呼吸道細菌感染具有很好的療效,且口服劑量低,不良反應少。本文對BT生物合成基因進行深入研究,為提高BT產量提供了重要依據(jù)。
通過生物信息學分析,從BT產生菌的全基因組序列中得到BT的生物合成基因簇,在基因簇中有4個內源調控基因和一個外源調控基因acyB2,其中orf2
2、3和orf42與生二素鏈霉菌S.ambofaciens中的srm22和srm40基因同源,二者都是螺旋霉素(Spiramycin,SP)生物合成的正調控基因,acyB2與srm40也互為同源基因。對acyB2、srm40和srm22基因在大腸桿菌中進行異源表達研究,只成功表達表達并純化出Srm22可溶性蛋白,EMSA實驗證實Srm22蛋白能與srm40和外源調控基因acyB2的啟動區(qū)進行結合,卻不能與自身啟動區(qū)以及基因簇內其它結構基因的
3、啟動區(qū)結合。這說明Srm22不是直接調控結構基因,而是通過調控srm40和acyB2來影響B(tài)T的生物合成。
通過生物信息分析推測出全局性調控基因:亮氨酸響應蛋白基因(lrp)和光禿家族基因(bldD),兩者都參與調控BT的生物合成。在大腸桿菌中表達并純化出Lrp和BldD蛋白,EMSA實驗證實了Lrp能與acyB2、srm40和srm22的啟動區(qū)結合,說明Lrp可能對這三個調控基因具有調控作用;而BldD與acyB2、srm2
4、2基因的啟動區(qū)沒有特異性結合,說明BldD不直接影響這些調控基因的表達。
在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加L-Leu能明顯提高發(fā)酵產物中BT的比例,在生物合成途徑上L-Leu與BT的異戊?;鶄孺満铣擅芮邢嚓P。Lrp蛋白參與多個代謝途徑的調控,其中包括L-Leu的生物合成,我們刪除Lrp的L-Leu結合結構域,希望解除L-Leu生物合成的反饋抑制,增加異戊?;孜?。我們利用HPLC檢測SP及BT產量,發(fā)現(xiàn)在Δlrp-SP變株中,SP總比例由原
5、株的76.3%提高至81.5%,其中SPⅢ產量提高了88.6%,在Δlrp-BT變株中,ISP總比例由原株的17.7%提高至18.9%,其中ISPⅢ產量提高了212.1%,說明刪除Lrp的L-Leu結合結構域能提高SP與BT的產量與組分比例。氨基酸含量結果表明,Δlrp-SP變株內BCAAs(Val:32.0μg/g;Leu:37.8μg/g;Ile:13.5μg/g)比原株內BCAAs(Val:65.1μg/g;Leu:62.6μg/
6、g;Ile:25.1μg/g)含量低,說明刪除Lrp的L-Leu結合結構域能增加菌體內BCAAs的分解代謝。通過轉錄組分析,我們發(fā)現(xiàn)BT和SP生物合成途徑,丙氨酸生物合成途徑,?;o酶A代謝途徑等相關基因表達量提高。
BT化學結構中含有三個糖基,這些糖基對抑菌活性至關重要,orf21基因(NDP-氨基己糖N二甲基轉移酶基因),推測其參與BT左側糖基福洛氨糖的生物合成,為了證實其功能,我們將orf21基因進行阻斷,經(jīng)過抑菌活性測
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 必特螺旋霉素生物合成調控的研究.pdf
- 碳霉素與必特螺旋霉素生物合成調控的研究.pdf
- 44115.歐典螺旋霉素的組分優(yōu)化
- 乙酰螺旋霉素質量分析研究.pdf
- 螺旋霉素高產菌種選育及發(fā)酵工藝優(yōu)化.pdf
- 金霉素生物合成的分子調控機制.pdf
- 林可霉素生物合成的調控與改造研究.pdf
- 雙水相法回收可利霉素生產廢水中的螺旋霉素
- 達托霉素優(yōu)質高效生物合成的調控機制研究.pdf
- 春雷霉素生物合成調控及高產菌株改造.pdf
- 魯抗生物醫(yī)藥循環(huán)經(jīng)濟產業(yè)園螺旋霉素建設項目環(huán)境影響報告書
- 第一部分4,5-雙氫-7-去氨甲?;?7-羥基-19-S-甲基格爾德霉素及其與格爾德霉素生物合成PKS后修飾的關系;第二部分必特螺旋霉素生物合成調節(jié)基因acyB2在大腸桿菌中的異源表達.pdf
- 阿奇霉素、青蒿琥酯、乙酰螺旋霉素及配伍用藥體內外抗弓形蟲作用的實驗研究.pdf
- 恰塔努加鏈霉菌中納他霉素生物合成調控機制研究.pdf
- 達托霉素生物合成基因族異源表達及調控機制初步研究.pdf
- 米多霉素生物合成機理的研究.pdf
- 玫瑰孢鏈霉菌中argR調控達托霉素生物合成機制的研究.pdf
- 美達霉素生物合成途徑中調控基因med-ORF10作用機制的初步研究.pdf
- 埃博霉素的生物合成與埃博霉素d內酰胺衍生物的半合成研究
- 氧化偶氮霉素的生物合成機制研究.pdf
評論
0/150
提交評論