可重新自組裝肝素納米粒聯(lián)合抗增殖和抗血管生成治療膠質瘤的研究.pdf

1、目的:開發(fā)可跨越血腦屏障(BBB)發(fā)揮抗膠質瘤細胞增殖、腫瘤內皮依賴性血管(EDV)和血管生成擬態(tài)(VM)的可重新自組裝肝素納米粒，考察其體內外生物活性和作用機制，為膠質瘤的藥物研發(fā)提供更好的思路，為臨床應用提供依據(jù)。
　　方法:通過核磁共振氫譜(1H NMR)、紫外分光光度計(UV)、BCA蛋白定量和基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MOLDI-TOF)驗證可重新自組裝肝素納米粒(H-S-R NPs1)是否制備成功;透射電子顯微

2、鏡(TEM)和動態(tài)光散射(DLS)研究其在水溶液和BBB環(huán)境中的表征;在體外血腦屏障模型中研究其在不同條件下的BBB穿透能力;應用流式細胞術、共聚焦顯微鏡、CCK-8、三維培養(yǎng)實驗考察其在體外對EphA2和αvβ3的膠質瘤細胞和新生血管內皮細胞的靶向能力、增殖和微管形成抑制能力;建立皮下/原位膠質瘤模型，通過活體成像考察其體內生物分布，并考察其體內抑瘤效果;通過免疫組化Ki67、CD34/PAS雙重染色研究其作用機制;HE染色評價其體內

3、安全性。
　　結果:1H NMR、UV、BCA蛋白定量和MOLDI-TOF結果證實成功制備H-S-RNPs1，其SWL和cRGD肽含量分別是12.57％和7.61％(w/w);TEM和DLS結果顯示H-S-R NPs約為均勻單分散的球形粒子，在水中的粒徑為164±16nm，在血液模擬環(huán)境中粒徑變小為63±11nm;體外血腦屏障模型結果顯示這種更小的粒徑有利于其跨越BBB;流式細胞術和共聚焦顯微鏡EphA2和αvβ3高表達的U87、

4、U251、HUVEC細胞對單靶向的H-S1、H-R1和雙靶向的H-S-R NPs1都有良好的攝取，而EphA2和αvβ3低表達的HEB細胞攝取較低;CCK-8實驗結果顯示H-S-R NPs1具有相對H-S1、H-R1和H-S-R NPs2更好的EphA2和αvβ3過表達細胞殺傷效果，而所有聚合物對HEB細胞都沒有明顯的殺傷效果;微管形成實驗表明H-S-R NPs1在U87、U251和HUVEC上展現(xiàn)了比H-S1和H-R1更好的抑制微管形

5、成的效果;體內分布實驗結果顯示，H-S-R NPs1在U251皮下膠質瘤荷瘤鼠和U87原位膠質瘤荷瘤鼠中都可以快速蓄積到腫瘤部位（0.5小時），12小時達到峰值，然后逐漸衰減;離體器官成像和組織切片共聚焦顯微鏡結果證實H-S-R NPs1可跨越血/腫瘤屏障到達膠質瘤組織;體內抑瘤實驗結果表明，H-S-R NPs1在皮下/原位膠質瘤荷瘤鼠中均有良好的抑制膠質瘤生長和延長荷瘤鼠生存期的效果;免疫組化結果顯示H-S-R NPs1治療組的腫瘤中

6、Ki67的表達率(20.39±2.57％)明顯低于對照組(89.69±3.74％)和H-S1治療組(58.78±4.19％)，而H-S-R NPs1治療組(11.33±0.58)的腫瘤中包含EDV(CD34+)和VM(CD34-/PAS+)的管道結構也明顯少于對照組(62.33±9.5)和H-S1治療組(30.67±2.89);HE染色結果顯示未發(fā)現(xiàn)H-S-R NPs1具有明顯的器官毒性。
　　結論:本研究制備的可重新自組裝肝素納