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文檔簡介
1、小鼠主動脈內皮細胞過表達 小鼠主動脈內皮細胞過表達 CAT 酶阻滯細胞周期進程由 酶阻滯細胞周期進程由G0/G1 期到 期到 S 期轉變 期轉變研究表明高劑量的過氧化氫會誘導細胞的凋亡和壞死,低劑量的過氧化氫具有促進細胞增殖作用,但過氧化氫在細胞周期進程中的作用機制尚不清楚。為了評定內源性過氧化氫在細胞周期進程中作用,文章研究人過氧化氫酶過表達轉基因鼠(hCatTg)主動脈內皮細胞,它消除了細胞內 H2O2。人過氧化氫酶過表達轉基因鼠(
2、hCatTg)主動脈內皮細胞(hCatTg MAECs) ,較野生型對照細胞表現出細胞增倍時間的延長((44.0 ± 4.7 h versus 28.6 ± 0.8 h, p<0.05) ,且表現出生長速率和 H2O2 的釋放減弱相一致。2、加入 aminotriazole(氨基三唑,一種除草劑)培養(yǎng),可以抑制 CAT 酶活性,人過氧化氫酶過表達轉基因鼠(hCatTg)主動脈內皮細胞生長速率減緩現象受到阻滯
3、。氨基三唑可以抑制 CAT 酶活性,進而消除過氧化氫酶過表達誘導的抗增殖作用。流式細胞儀分析顯示與野生型相比hCatTg MAECs增倍時間的延長主要是由于G0/G1期的延長, (25.0 ± 0.9 h versus 15.9 ± 1.4 h, p<0.05).3、 hCatTg MAECs表現出CDK復合物減弱,包括cyclin D–Cdk4 andcyclin E–Cdk2,這些復合物負責細胞周期由G0/
4、G1期到S期轉變。同時伴隨有CDK抑制酶P21和P27的表達增加,敲除P21和P27后會減弱hCatTg MAECs細胞CAT酶過表達所造成的抗增殖作用。4、 結合CAT是一種H2O2清除劑,提示內源性H2O2通過促進細胞白A、B、D、E在特定細胞周期形成復合物,促進細胞周期進程。特別的是,處于休眠的G0期細胞進入細胞周期要受到cyclin D–Cdk4的調控,cyclin E–Cdk2復合物調控細胞由G1期向S期轉變,而S期是DNA合
5、成時期,受到cyclin A–Cdk2復合物的調控。最終,要通過有絲分裂G2/M期受到cyclinB–Cdk1 復合物調控。cyclin–Cdk復合物的活性受到細胞內外信號的緊密調節(jié),包括CDK的磷酸化和CDK抑制蛋白(CKIs)水平,這些信號可以影響cyclin 和 Cdk 的存在。例如,CDK抑制蛋白(CKIs)P21和P27的過表達會促進細胞生長阻斷,使細胞周期阻斷于G1期。越來越多證據表明H2O2通過靶向性促進細胞周期進程來調節(jié)
6、細胞增殖。特別地,據報道H2O2水平的波動與細胞周期進程具有一致性,通過過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶過表達消除內源性的H2O2,可以誘導細胞在G0/G1期阻斷,并降低細胞DNA合成。但是H2O2調節(jié)細胞周期進程的確切機制尚未明晰。CAT是一種可以將H2O2轉變?yōu)樗脱鯕獾拿割悺D壳?,研究者通過在培養(yǎng)基中加入CAT或者用病毒感染誘導產生CAT的轉基因型細胞,證明了內源性H2O2在在血管內皮細胞增殖中的調控作用。這些研究都有局限性,因為在
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