人lif及osm轉基因細胞的建立及其對臍血cd3439;造血干祖細胞體外擴增作用的研究

1、蘇州大學碩士學位論文人LIF及OSM轉基因細胞的建立及其對臍血CD34造血干/祖細胞體外擴增作用的研究姓名：苗莉申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：繆競誠;楊吉成20070501人L I F 及O s M 轉基因細胞的建立及其對臍血c D 3 4 + 造血千衄細胞體外擴增作用的研究 中文摘要功。R T - P c R 結果分別有約6 0 9 b p 和7 5 0 b p 特定條帶，說明脂質體介導的人L I F 和O S M基因可以在

2、人胚肺成纖維細胞w I ．3 8 中轉錄；E L I S A 結果測定表達產物的濃度分別為L I F ：1 1 ．1 0 5 p ∥m l ，O S M ：4 9 ．5 4 7 p g ，m l ；同法鑒定逆轉錄病毒介導的人L I F 和0 S M基因可以在人胚腎成纖維細胞2 9 3 T 中表達，且轉基因2 9 3 T 細胞上清中細胞因子含量比轉基因w I 一3 8 細胞上清多，分別為L I F ：1 1 0 ．1 3 4 p g ／m

3、 l ，O S M ：1 5 9 ．9 8 7 p g ／m l ；表達產物具有相應的天然的生物學活性，能夠分別抑制人白血病細胞H L 6 0 和人黑色素瘤細胞A 3 7 5 的生長。采用免疫磁珠法分離臍帶血C D 3 4 + H s P C ，C D 3 4 + 細胞純度可達9 0 ％以上，產率約為4 5 ％，表面分子陽性率分別約為C D 3 18 9 ．3 3 ％，C D 6 2 L 2 3 ．6 0 ％，C D 4 9 d 8 5

4、 ．4 ％，C D 5 47 4 ．9 ％，C x C R 47 6 ．6 ％，共培養(yǎng)7 天后，再次測定，C D 3 4 + 細胞比例均有不同程度的降低。結果顯示：培養(yǎng)液中添加細胞因子h O S M 組的C D 3 4 + 細胞比例相比未添加組高，細胞因子聯(lián)合飼養(yǎng)層組相比單純細胞因子組高，轉O S M 、L I F 基因的飼養(yǎng)層組相比未轉基因組高。研究還發(fā)現(xiàn)，細胞因子h O S M 還可減緩臍帶血C D 3 4 + 細胞c x c R

5、4 表達的下降程度，提示0 S M 有助于保持臍血造血細胞的歸巢能力。結論：本研究建立了兩種h L I F 、h o s M 基因真核穩(wěn)定表達細胞株，表達產物具有相應的生物學活性；成功構建了重組逆轉錄病毒載體p E G Z ／：M C S ．H A ．h L I F 和p E G 刀M c S —H A - h o s M ；采用免疫磁珠法分離、富集到臍帶血c D 3 4 + H s P c ，純度可達9 0 ％以上；實驗結果初步顯示經