動物細胞與組織培養(yǎng)

1、◆ 動物細胞與組織培養(yǎng),◆ 動物細胞融合,◆ 單克隆抗體制備,◆ 細胞核移植技術(shù)和動物體克隆動物,動物細胞工程,(1) 動物細胞與組織培養(yǎng),1、定義:,2、選材：,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,動物細胞培養(yǎng)指在體外模擬動物體內(nèi)環(huán)境，將動物細胞或組織在無菌，溫度適宜和營養(yǎng)充分的條件下，使其繼續(xù)生長，增殖并維持原有結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。,,原因:細胞生命旺盛，分裂能力強.,腫瘤組織或細胞 ＞ 正常組織或細胞,動物組織或細胞培養(yǎng)的難

2、易程度,分化程度低的組織或細胞 ＞ 分化程度高的組織或細胞,幼體組織或細胞 ＞ 老齡組織或細胞,3、動物細胞培養(yǎng)條件：,(1)、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素 定期更換培養(yǎng)液 ）,防止培養(yǎng)過程中污染 防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害,(2)、培養(yǎng)基成分：種類：,葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等,?,?,(3)、溫度和PH 37 ℃左右, 7.2-7.4

3、(4)、氣體環(huán)境 O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）,和植物組織培養(yǎng)基相比有何獨特之處？,液體培養(yǎng)基 、成分中有動物血清（補充合成培養(yǎng)基所缺乏的物質(zhì)）等,4.動物細胞生長特性：,細胞貼壁： 懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。細胞的接觸抑制： 當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。,5.過程：,原代培養(yǎng)：一般細胞繁殖1-

4、10代，就發(fā)生接觸抑制不在分裂，這種培養(yǎng)就要原代培養(yǎng)。,傳代培養(yǎng)：貼滿瓶壁的細胞由于接觸抑制不再分裂，需重新用胰蛋白酶處理，再分瓶培養(yǎng)讓細胞繼續(xù)增殖。,細胞株：原代細胞一般傳至10代左右生長停止，大部分細胞衰老死亡，少數(shù)存活到40~50代，這種傳代細胞為細胞株，,細胞系：細胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的改變，可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,,細胞懸

5、浮液,胰蛋白酶,,10代細胞,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),,無限傳代,,單個細胞,,加培養(yǎng)液,5.過程：,動物組織塊,細胞懸液,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),胰蛋白酶處理,幼齡動物的器官組織；動物胚胎,動物細胞培養(yǎng),1.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質(zhì)是什么成份？2.細胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？3.既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？,胰

6、蛋白酶水解蛋白質(zhì),蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)和磷脂,能,注意時間的控制,不能，因為兩者的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近,問題與思考,5、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？,成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細胞懸浮液利于培養(yǎng)，使每個細胞與培養(yǎng)液接觸,不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，因為動物細胞的全能性會隨著動物細胞分化程度的提高而逐漸受到抑制,4、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？,6、

7、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？,7、如此時細胞數(shù)量并未達到人們的需求，應該怎樣辦？,當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞分裂就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。,將貼滿細胞壁的細胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。,這樣的過程叫做傳代培養(yǎng),8、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？,9、傳代培養(yǎng)的細胞能一直傳代下去嗎？,10、有些為何能一直傳下去？,在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng),不能,遺

8、傳物質(zhì)發(fā)生改變，向癌細胞方向發(fā)展。,細胞的全能性,細胞株、細胞系,植物體,培養(yǎng)結(jié)果,獲得細胞或細胞產(chǎn)物,快速繁殖、培育無病毒植株等,培養(yǎng)目的,葡萄糖、動物血清,蔗糖、植物激素,培養(yǎng)基特有成分,液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基性質(zhì),細胞增殖,原理,動物細胞培養(yǎng),植物組織培養(yǎng),比較項目,植物組織和動物細胞培養(yǎng)的比較,6、動物細胞培養(yǎng)應用,大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）作為基因工程中的受體細胞培養(yǎng)的動物細胞可以用于檢

9、測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性為治療和預防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù),1、下列屬于動物細胞工程中的工具是（ ） A．限制性內(nèi)切酶 B．DNA連接酶 C．胰蛋白酶 D．果膠酶,C,2、在動物細胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中，正確的是（ ）A．動物細胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細胞分泌蛋白B．動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細胞分散C．細胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中D．培養(yǎng)至50

10、代后繼續(xù)傳代的細胞是細胞株,B,3.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于（ ） A.培養(yǎng)基不同； B.動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行； C.動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能； D.動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培 養(yǎng)為胚狀體。,A,4、下圖是動物細胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此圖回答,(1)容器A中放置的是動物器官或組織。它一般取自___________。(2)容器A中的動物器官或組織

11、首先要進行的處理是__________，然后用 酶處理，這是為了使細胞分散開來。這樣做的目的是_______________. (3)培養(yǎng)首先在B瓶中進行。瓶中的培養(yǎng)基成分有_______ ___等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，一般傳到第 代，有許多細胞衰老死亡，到這時的培養(yǎng)稱為___________.,幼齡動物的器官、組織或動物胚胎,,,,,,原代培養(yǎng),10,葡萄糖、氨基酸、無機

12、鹽、維生素和動物血清,使每個細胞能與培養(yǎng)液接觸,胰蛋白,剪碎,,(4)為了把B瓶中的細胞分裝到C瓶中，用_____處理，然后配置成___________，再分裝。(5)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細胞全部死亡。原因是________________。,細胞沒有發(fā)生癌變,胰蛋白酶,細胞懸浮液,,5．某研究小組進行藥物試驗時，以動物肝細胞為材料，測定藥物對體外培養(yǎng)細胞的毒性。供培養(yǎng)的細胞有甲、乙兩種，甲細胞為肝腫瘤細胞，乙細胞為正

13、常肝細胞。請回答下列有關(guān)動物細胞培養(yǎng)的問題：（1）將數(shù)量相等的甲細胞和乙細胞分別置于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)液及其它培養(yǎng)條件均相同。一段時間后，觀察到甲細胞數(shù)量比乙細胞數(shù)量__________。（2）在動物細胞培養(yǎng)時，通常在合成培養(yǎng)基中加入適量血清，其原因是________ 。細胞培養(yǎng)應在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進行，CO2的作用______________。,多,補充合成培養(yǎng)基缺乏的物質(zhì),維持溶液的PH,,（3）在兩種細胞生長過程中，當

14、乙細胞鋪滿瓶壁時，其生長____________。藥物試驗需要大量細胞，兩種細胞頻繁傳代，甲細胞比乙細胞可以傳代的次數(shù)更_______。若用動物的肝臟組織塊制備肝細胞懸液，需用___________消化處理。（4）為了防止細胞培養(yǎng)過程中細菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的_____________。,停止,多,胰蛋白酶,抗生素,,（5）已知癌細胞X過量表達與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，要試驗一種抗腫瘤藥物Y對甲細胞生長的影響，可將甲細胞分為A