濁點萃取-高效液相色譜法檢測牛奶中的喹諾酮類抗生素.pdf

1、我國國民經(jīng)濟近些年來飛速發(fā)展，畜牧業(yè)也呈現(xiàn)出良好的發(fā)展勢頭，但與此同時動物性食品中獸藥殘留超標的現(xiàn)象日益突出，對人類健康和環(huán)境安全構成威脅，也影響國家對外經(jīng)濟貿(mào)易。近幾年各國政府相繼建立并不斷完善動物性食品的獸藥殘留監(jiān)測體系，限量標準日趨嚴格，這無疑對動物性食品中的獸藥多殘留分析方法提出了高效、經(jīng)濟、快速、準確的要求。
　　喹諾酮類藥物是畜牧業(yè)中應用廣泛的抗微生物藥劑，在動物源食品中的過量或不當使用會導致誘導耐藥菌株的產(chǎn)生，造成食

2、用者腸道菌群失衡，帶來潛在“三致”（致癌、致畸、致突變）作用，從而威脅人類健康。目前喹諾酮類獸藥殘留檢測方法多有報道，但通常前處理技術操作復雜、使用有機溶劑量大，對環(huán)境造成一定負擔。濁點萃取技術作為一種經(jīng)濟、環(huán)保的新興樣品前處理方法，與傳統(tǒng)的溶劑萃取方法相比具有有機溶劑消耗量少、萃取效率高、操作簡單的優(yōu)點，能適應現(xiàn)代分析化學的發(fā)展要求。本文研究并確立了對牛奶中的喹諾酮類抗生素進行萃取、富集并進行高效液相色譜分析的條件，建立了濁點萃取-高

3、效液相色譜法檢測牛奶中喹諾酮類抗生素的理想方法。
　　主要研究結果如下:
　　(1)建立了濁點萃取技術對牛奶中喹諾酮類目標物進行富集分離的方法，包括破乳方式和濁點萃取方法。確定了冰乙酸的用量為0.15 mL及無水硫酸鈉添加量為0.95g，離心參數(shù)為5℃、10000 r/min條件下離心10 min的最佳破乳條件;以80 g/LTween20水溶液為萃取劑，濃氨水的體積為60μL，正丁醇、無水硫酸鈉的添加量為0.2 mL和0.

4、25 g，平衡溫度和時間為50℃和30 min的濁點萃取條件。利用此技術在0.05、0.1、0.2 mg/L三個水平上對供試牛奶進行添加回收率實驗，實驗結果表明:6種喹諾酮類藥物在優(yōu)化條件下的添加回收率在71.3％～96.8％之間，相對標準偏差在1.24％～6.02％之間，實驗結果準確，精密度高，符合藥物殘留檢測的要求。
　　(2)將目標物進行高效液相色譜-紫外檢測器分析，確定了色譜條件:以0.1％的甲酸水溶液(A)和乙腈(B)為

5、流動相，流速1 mL/min，選用反相色譜柱InertsilODS-3(4.6 mm×150 mm，5μm)，柱溫35℃，在紫外檢測器下采用二元高壓梯度洗脫:(B)起始量為12％，20 min內(nèi)升為18％，20.01 min突變?yōu)?8％并在37 min時升至40％;紫外檢測波長在前20 min為280 nm，20.01 min突變?yōu)?50 nm并保持。在此條件下樣品中目標物分離良好，無雜峰干擾;各藥物標準品在0.05～2μg/mL范圍內(nèi)