鱖魚(yú)JAK、STAT家族的分子克隆和JAK-STAT通路功能的初步鑒定.pdf

1、鱖魚(yú)(Siniperca chuatsi)是我國(guó)重要的魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖品種，具有較大經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但養(yǎng)殖面積和密度的不斷增加，使得養(yǎng)殖水環(huán)境日趨惡化，鱖魚(yú)病害頻頻爆發(fā)，帶來(lái)經(jīng)濟(jì)損失，還制約鱖魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。JAK—STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是機(jī)體抗病毒免疫中重要的途徑之一，在生長(zhǎng)、發(fā)育、免疫、凋亡等方面發(fā)揮著重要作用。為了更好的研究鱖魚(yú)先天性免疫機(jī)制，通過(guò)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物釣出JAK家族中4個(gè)基因和STAT家族中5個(gè)基因的表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)。 通過(guò)

2、快速擴(kuò)增cDNA末端(Rapid amplification of cDNA ends，RACE)技術(shù)，克隆得到鱖JAK、STAT家族成員的全長(zhǎng)cDNA序列。其中JAK2、TYK2、STAT6的cDNA序列是在魚(yú)類(lèi)中首次克隆得到。通過(guò)對(duì)氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)鱖魚(yú)的JAK、STAT家族基因和高等脊椎動(dòng)物相對(duì)應(yīng)的基因同源性較高，且具有相似的結(jié)構(gòu)域，推測(cè)可能有相似功能機(jī)制。構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，JAK、STAT家族成員分別與魚(yú)類(lèi)及其他

3、脊椎動(dòng)物的對(duì)應(yīng)蛋白聚類(lèi)在一起，表明在魚(yú)類(lèi)分化以前，JAK、STAT家族各成員已經(jīng)發(fā)生了分化。 應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，分析了JAK、STAT家族成員在健康魚(yú)中的組織分布。組織分布結(jié)果顯示，除了肌肉，大部分被檢測(cè)的器官中皆有JAK、STAT轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)。JAK1、JAK2在性腺中表達(dá)量最高，JAK3主要分布在鰓，而TYK2主要分布在腦。STAT1和STAT6在脾中表達(dá)量最高，而STAT3在性腺中表達(dá)高，STAT4在鰓，STAT

4、5在肝。 哺乳動(dòng)物在抗病毒的免疫反應(yīng)中，會(huì)利用干擾素激活JAK—STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，調(diào)控多種抗病毒、介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的相關(guān)基因表達(dá)，干擾病毒入侵、轉(zhuǎn)錄、復(fù)制、翻譯、成熟、裝配及釋放等多個(gè)環(huán)節(jié)以抵抗病毒感染。為了研究鱖魚(yú)JAK—STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在抗病毒方面作用，我們利用poly I：C(干擾素誘導(dǎo)劑)刺激ISKNV敏感的鱖仔魚(yú)細(xì)胞MFF-1，發(fā)現(xiàn)鱖魚(yú)JAK—STAT通路被激活，下游SOCS1、Mx、IRF-1表達(dá)明顯上調(diào)，表明它