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文檔簡介
1、對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)是困擾對蝦養(yǎng)殖業(yè)最主要的病原體,目前人們對它的侵染機制還缺乏了解。本研究在建立WSSV體外感染模型的基礎上,應用蛋白質合成抑制劑來阻斷病毒早期、后期基因的轉錄,然后通過基因芯片的方法篩選病毒的極早期基因,共獲得了27個在極早期樣品中特異表達的陽性探針,其中包括了24個候選的極早期基因(>100aa)。通過RT-PCR方法以及轉錄時相分析對這些候選基因進行驗證,最終鑒定了16個WSSV的極早期基因(包括一個已
2、知的極早期基因/e/),其中12個基因在WSSV基因組中呈基因簇分布。進一步分析表明WSSV的極早期基因編碼了至少3類調控因子:包括4個具有轉錄激活能力的核蛋白WSV051,WSV069,WSV079,WSV100;1個細胞核內的蛋白激酶WSV083,以及1個定位于核膜與中心體上的泛素連接酶E3,WSV249。這些極早期蛋白可能通轉錄調控,翻譯后修飾等方式對病毒的復制以及宿主細胞進行精密的調控,對它們的進一步研究將有助于揭示WSSV的感
3、染機制,建立有效的防治方法。 此外,由于DNA病毒極早期基因啟動子是基因工程中強啟動子的良好來源,本研究還對WSSV極早期基因的啟動子區(qū)進行了克隆分析,并檢驗了它們啟動基因轉錄的能力。結果表明wsv051,wsv069,wsv083,wsv108,wsv249的啟動子在在昆蟲細胞表現(xiàn)出很強的活性;而wsv249的啟動子還可以在螯蝦原代細胞中啟動基因表達。因此這些啟動子在構建基因工程表達載體,特別是適用于蝦類的表達載體上有一定的應
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