作物抗蚜蟲轉基因技術研究.pdf

1、棉蚜是導致世界上農作物產量嚴重下降的主要害蟲之一。成若蚜群集于棉葉背面和嫩尖上，以針狀口器刺吸汁液，由于組織的細胞受到破壞，致使棉葉正反面生長不平衡，葉片背面卷曲，形成卷葉，植株矮縮，受害棉苗葉發(fā)育受阻。而噴施化學殺蟲劑嚴重污染環(huán)境，通過表達毒蛋白來抑制或殺死害蟲可能使蚜蟲產生抗性。所以尋找一種新型的抗蟲策略既能夠有效地抵抗蚜蟲，又是安全的，就成為一種迫切的要求。
　　 RNA干擾是近期發(fā)現的一種新的基因調控機制，它利用RNA序

2、列匹配，專一地識別靶基因，在轉錄水平、轉錄后水平或翻譯水平抑制靶基因表達。在農業(yè)上RNAi技術已發(fā)展成為控制蟲害、提高作物品質的新方法。與傳統(tǒng)轉基因手段相比，這一技術更具選擇性和安全性。
　　 本研究擬嘗試通過RNAi技術，降解靶基因mRNA，抑制棉蚜內源靶基因的表達，從而達到抑制棉蚜數量的目的。根據已知生物信息學數據，通過RT-PCR技術從棉蚜中克隆了AP1，Catb5，Catb6，RPL18基因，AP1為網格蛋白基因，Cat

3、b5、Catb6為組織蛋白酶基因家族的兩個基因，RPL18為核糖體蛋白酶基因。這四種基因都為棉蚜的持家基因，由于Catb5、Catb6組織蛋白酶基因缺少3’端，分別對Catb5、Catb6做了3’RACE，將AP1，Catb5，Catb6，RPL18基因分別通過正向和反向插入到pBi35SG12質粒中，構建了pBi35SAP1，pBi35SC5，pBi35SC6，pBi35SR18四個RNAi載體，通過農桿菌介導的方法將四個基因導入擬南