抗蚜蟲PPA基因的小麥轉(zhuǎn)化.pdf

1、近年來植物轉(zhuǎn)基因技術研究發(fā)展迅速，大豆和棉花等轉(zhuǎn)基因作物已大面積推廣應用，取得了巨大的經(jīng)濟與社會效益。小麥是世界主要的糧食作物，1992年第一株轉(zhuǎn)基因小麥誕生，為開展小麥分子育種奠定了基礎。本課題針對目前小麥轉(zhuǎn)基因中存在的低轉(zhuǎn)化率、栽培品種少、抗蟲基因單一等問題，擬利用掌葉半夏凝集素(Pinelliapedatisecta agglutinin，PPA)基因轉(zhuǎn)化小麥，建立較成熟的小麥栽培品種抗蚜蟲基因的轉(zhuǎn)化體系。
　　 本文選用

2、了“石4185”、“揚麥12”等7個小麥品種，研究了品種、激素等條件對小麥愈傷組織誘導及分化的影響，并通過檢測GUS基因的瞬時表達情況，研究了基因槍介導法的主要參數(shù)對轉(zhuǎn)化效率的影響。將含有抗蚜蟲基因(PPA基因)和GUS報告基因的質(zhì)粒載體導入小麥愈傷組織，在含潮霉素的選擇培養(yǎng)基上進行篩選、分化及壯苗，獲得了抗性植株。
　　 實驗結(jié)果表明，最適的轉(zhuǎn)化受體是幼胚誘導的胚性愈傷組織，轟擊前6小時及轟擊后18小時將愈傷組織置于含甘露醇0

3、.4 mol·L-1的高滲培養(yǎng)基上進行高滲處理有助于提高轉(zhuǎn)化率，當轟擊壓力為1100 psi，質(zhì)粒1μg/槍及金粉300μg/槍時，GUS瞬時表達率及表達量最高。將已轟擊愈傷組織在含2 mg·L-1的2，4-D的恢復培養(yǎng)基上恢復培養(yǎng)5天至7天能有效提高愈傷組織的植株再生能力。用60 mg·L-1的潮霉素篩選30天后可以獲得抗性愈傷組織，經(jīng)過檢測抗性愈傷組織中GUS基因穩(wěn)定表達。在KT濃度為1 mg·L-1且NAA濃度為0.1 mg·L-