TSH方法識別馬鈴薯塊莖器官發(fā)生基因及其表達分布研究.pdf

1、莖是高等植物的重要器官之一，馬鈴薯匍匐莖及塊莖是莖的天然變異，揭示其發(fā)生機制，不僅對馬鈴薯莖器官發(fā)生、而且對以莖器官為收獲對象的作物的相關研究具有重要的參考價值，然而，匍匐莖及塊莖變異形成的分子機理及調控方式至今尚屬未知。
　　 本研究以不同成熟期馬鈴薯的匍匐莖和塊莖RNA為材料，構建匍匐莖及塊莖的消減cDNA文庫，以期識別其形成特異表達基因，而后檢測特異表達基因在不同基因型不同器官、發(fā)育階段中表達，確定其表達分布特點，為最終揭

2、示塊莖發(fā)生分子機理奠定基礎。主要研究結果如下：
　　 1、以兩基因型匍匐莖RNA為檢測組(tester)或驅動組(driver)、塊莖RNA為驅動組(driver)或檢測組(tester)，通過轉錄子消減雜交(TSH)，構建了匍匐莖和塊莖消減cDNA文庫各2個，菌落觀察統(tǒng)計及其后的檢測結果顯示，文庫中重組率為95%左右，滿足文庫質量要求。
　　 2、對文庫進行菌落PCR篩選，隨機挑取142個白色克隆分析發(fā)現(xiàn)117個為陽性

3、結果，陽性率為82.4%，文庫插入片段在100bp-1000bp之間；對42個陽性克隆進行了測序，序列經生物信息學分析，得到唯一非重復的EST序列21個。
　　 3、經GenBank數(shù)據(jù)庫blastx和blastn對21個EST進行了同源性比對，結果顯示匍匐莖及塊莖消減文庫中，未識別且功能未知基因分別為26.7%和66.7%，已知功能基因涉及信號傳導、轉錄調控、蛋白合成代謝、生物與非生物脅迫等過程。
　　 4、RT-PC