魔芋軟腐病拮抗放線菌的分離、鑒定及其應用的初步研究.pdf

1、本課題從魔芋根際土壤中分離篩選魔芋軟腐病拮抗放線菌,并對其中的一株放線菌SJK18進行菌種鑒定、培養(yǎng)優(yōu)化、主要抑菌代謝產物分離與結構鑒定,同時用拮抗放線菌與魔芋內生細菌、解磷真菌和固氮細菌等制成復合微生物菌劑應用于魔芋盆栽和田間生防試驗中,實驗結果如下:
　　(1)從魔芋根際土壤中分離得到11株魔芋軟腐病拮抗放線菌,通過復篩,篩選出對魔芋軟腐病有顯著拮抗作用的放線菌SJK18。此外,SJK18還能夠拮抗4種水稻白葉枯病原細菌;其對

2、四種稻瘟病原菌(65A、1073-2、1366和IK81-3)、馬鈴薯干腐病原菌、番茄早疫病原菌、蘋果炭疽病原菌和梨腐爛病原菌等病原真菌也有拮抗作用,抑菌率分別為62.2％、73.3％、62.5％、68.3％、49.1％、60.0％、66.4％和46.6％。
　　(2)采用傳統(tǒng)分類方法和現(xiàn)代分子分類方法,并結合其代謝活性物質結構分析,對菌株SJK18進行了分類鑒定。結果表明,SJK18為弗氏鏈霉菌Streptomyces frad

3、iae中一個新的亞種。對該菌的16S rRNA基因序列和基因16S-23S rRNA序列在GenBank數(shù)據庫中進行了注冊,序列號分別為JN256680和JN381162。
　　(3)考察了SJK18產孢培養(yǎng)條件,得出其在35℃、pH6.0時更有利于產孢子;其最適產孢培養(yǎng)基配方為蛋白胨0.2％,NaCl0.3％,牛肉膏0.3％。
　　(4)以SJK18發(fā)酵液的抑菌活性為指標,以高氏一號液體培養(yǎng)基為發(fā)酵基礎培養(yǎng)基,通過單因素實

4、驗,確定SJK18最適發(fā)酵條件為:發(fā)酵時間為7d,溫度30℃,轉速160rpm,接種量0.4％,發(fā)酵初始pH6.0,碳源為玉米粉,氮源為KNO3。通過正交實驗,得出SJK18最適發(fā)酵抑菌培養(yǎng)基為:玉米粉2.5％、KNO30.1％、NaCl0.2％、KH2PO40.04％、MgSO4·7H2O0.04％、微量元素1mL/L。
　　(5)通過乙醇沉淀,濃縮,結晶,從SJK18在高氏一號液體培養(yǎng)基的發(fā)酵液中分離出其主要抑菌活性成分,并通

5、過IR、NMR和TLC分析,鑒定該成分為苯酚。
　　(6)在魔芋盆栽試驗中,以6種菌劑(1:SJK18;2:SJK4;3:SJK5;4:SJK10;5:混合拮抗放線菌;6:混合拮抗放線菌、內生細菌、解磷真菌和固氮細菌)處理的魔芋葉子未發(fā)病,而空白處理的魔芋葉子發(fā)病面積為13.3％。與空白對照相比,6種菌劑均能促進魔芋葉子的生長和增加魔芋球莖濕重和干重;6種菌劑處理的魔芋,其葡甘聚糖含量分別提高了9.50％、4.25％、21.22％