土壤放線菌的分離、鑒定及其活性化合物的研究.pdf

1、放線菌由于其產(chǎn)生抗生素、酶及其抑制劑等有用生物活性物質，具有巨大經(jīng)濟價值，至今發(fā)現(xiàn)的兩萬種生物活性物質中，約70％是由放線菌產(chǎn)生的。而土壤又是放線菌含量最豐富的地方，因此開發(fā)土壤放線菌具有十分重要的意義。為了從土壤中分離出放線菌；以及從這些菌株的發(fā)酵物中分離出新的微生物農藥。本研究采用了選擇性培養(yǎng)基結合三重抗生素抗性篩選法對土壤放線菌進行篩選，對篩選的菌株進行了其活性化合物的研究，具體研究內容如下：
　　 （1）放線菌的分離。對

2、來自四川省達州市、湖北省武漢市、山東省臨沂市、遼寧省海城市、黑龍江省哈爾濱市等五個地區(qū)的土樣進行自然干燥等預處理后，采用選擇性分離培養(yǎng)基腐殖酸培養(yǎng)基加20μg/mL的萘啶酮酸進行放線菌的選擇性分離。共分離得到54株放線菌。
　　 （2）高活性菌株的篩選。采用鏈霉素（Streptomycin）、慶大霉素（Gentamicin）及利福平（Rifampicin）三重抗生素抗性篩選法對所得到的放線菌進行進一步篩選。最終得到4株活性很高的

3、放線菌，其分別是10號、49號、50號和52號放線菌，并對其進行了進一步研究。
　　 （3）發(fā)酵粗提物對細菌和真菌的抑制研究。將4株放線菌的發(fā)酵粗提物，進行了對2種細菌及9種致病真菌的抑菌活性研究，結果表明，其發(fā)酵粗提物對細菌的抑菌圈均達到20mm以上，對9種真菌也表現(xiàn)出了不同程度的抑制活性，有的甚至達到了95％以上。
　　 （4）發(fā)酵粗提物的除草活性研究。將這4株放線菌的發(fā)酵粗提物進行了2種除草劑靶標酶的篩選和除草活性

4、的測定。結果顯示10號菌株的發(fā)酵粗提物能抑制天冬酰胺合成酶，同時對稗草和苘麻均有很強的抑制作用。
　　 （5）發(fā)酵粗提物的溫度穩(wěn)定性研究。經(jīng)過對這4株放線菌的發(fā)酵粗提物的熱穩(wěn)定性研究，得出的結果是10號、50號和52號放線菌的發(fā)酵粗提物對溫度的穩(wěn)定性較好，當溫度達到90℃時，還具有很強的抑菌活性；49號菌株的發(fā)酵粗提物對溫度的穩(wěn)定性較弱，當溫度達到30℃，其抑菌活性就完全喪失了。
　　 （6）放線菌的分類學研究。結合經(jīng)典

5、分類和分子生物學中16SrDNA分類，對這4株放線菌的分類研究表明：其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征均與鏈霉菌屬一致：其其中10號放線菌同鏈霉菌Streptomyceslavendulae的相似性達到99％；49號放線菌同鏈霉菌Streptomycesviolaceolatus的相似性達到99％；50號放線菌同鏈霉菌Streptomycesolivaceus的相似性達到99％；52號放線菌同鏈霉菌Streptomycespactums

6、train173848的相似性達到100％。進一步確定這4株放線菌均屬于鏈霉菌屬（Streptomyces）。
　　 （7）發(fā)酵粗提物的分離。將這4株放線菌的發(fā)酵粗提物進行了分離、純化及結構鑒定。結果顯示，其中從10號菌株中分離出了6種化合物；49號菌株中分離出了化合物fogacin，50號菌株中分離出了具有抗癌、抑菌、除草等多種用途的活性化合物borrelidin，從52號菌株中分離出了2種化合物。
　　 （8）化合物