用花粉管通道法將豌豆DNA導入小麥及其后代的分子驗證.pdf

1、山東農業(yè)大學碩士學位論文用花粉管通道法將豌豆DNA導入小麥及其后代的分子驗證姓名：張立申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：王憲澤2002.6.1張立： 用花粉管通道法將豌豆D N A 導入小麥及其后代的分子驗證摘要在我國小麥產量已處于較高水平的前提下，改善和提高小麥品質就成為育種工作者一項迫切的任務。本研究通過花粉管通道法將豌豆基因組D N A導入高產低蛋白小麥品種魯麥2 2 號，以期提高其蛋白質含量，并探討該方法在改

2、良小麥品質方面的作用。以篩選的變異體T 2 2 0 X 為材料，對其醇溶蛋白、同工酶表達和D N A 水平上的差異以及蛋白質含量的變化等方面進行了研究。f 獲得了如下結果：1 ． 種子醇溶蛋白電泳結果顯示，變異體T 2 2 0 X 酶帶與受體魯麥2 2 號相比，既有新的酶帶增加，也有酶帶缺失的情況。說明外源D N A 的導入影響到醇溶蛋白組分的變化，根據(jù)醇溶蛋白基因定位，初步認定外源D N A 影響到小麥的第一或者第六號染色體。2 ．

3、小麥幼苗期過氧化物酶活性的測定顯示，變異體T 2 2 0 X 的酶活性高于受體魯2 2 ；過氧化物酶電泳顯示，T 2 2 0 X 和魯2 2 過氧化物酶在酶帶深淺和數(shù)目方面都存在差異，說明外源遺傳物質已影響到過氧化物酶的變化。3 ． R A P D 分析結果顯示，變異體T 2 2 0 X 和受體魯2 2 在D N A 水平上存在較大差異。經(jīng)引物S 1 0 3 擴增，在變異體I “ 2 2 0 1 中出現(xiàn)8 5 0 b p 的特異片段；引

4、物$ 7 4 在變異體T 2 2 0 2 中擴增出1 5 0 0 b p 和4 0 0 b p 的兩條新帶：引物$ 6 4 在變異體T 2 2 0 3 中擴增出兩條新帶，大小分別為9 8 0 b p 和5 5 0 b p ；引物s 1 1 8 在變異體T 2 2 0 4 擴增出一條4 8 0 b p 的新帶。這可能是外源D N A 片段整合進受體的基因組中，改變基因的順序或者引起基因堿基的缺失、插入，從而在基因水平上發(fā)生突變。4 ． 蛋