

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、就眠蛻皮是家蠶幼蟲的一種重要生理現象,家蠶眠性性狀主要受第6連鎖群上的眠性主基因M控制,此外還受到許多修飾基因及環(huán)境條件的影響。本研究應用高分辨率熔解分析(HRM)技術篩選具有多態(tài)性的SSR標記,進行眠性主基因的定位,進而應用RACE技術克隆候選基因,并對候選基因的表達進行檢測,以期找出控制家蠶眠性的主基因。
本研究取得的主要進展如下:
(1)HRM技術用于家蠶SSR分子標記基因型鑒定可行性
理論上HRM技
2、術可以鑒定單個堿基的基因型多態(tài)性,為了優(yōu)化和確定適合于家蠶基因組SSR分子標記的HRM分析的技術參數,并驗證熔解曲線多態(tài)性產生的機制,我們選擇實驗中出現頻率較高的3種典型熔解曲線多態(tài)性的多態(tài)性標記產物進行回收克隆測序,并進行CLUSTALW比對。
結果表明,應用HRM分析技術篩選出的標記多態(tài)性的產生機制多數是序列長度多態(tài)性和單堿基多態(tài)性的綜合作用。研究結果驗證了HRM技術應用于家蠶SSR標記基因型分析的可行性和可靠性。
3、 (2)家蠶眠性主基因M的定位
本研究采用四眠蠶品種大造(p50,+M/+M)與三眠蠶品種C3白(M3/M3)構建BC1M回交群體p50×(C3白×p50),選擇其中的598頭三眠蠶個體作為定位群體,應用高分辨率熔解曲線分析(HRM)技術進行家蠶基因組SSR標記基因型分析,對M基因進行精細定位。通過HRM篩選與M基因連鎖的多態(tài)性SSR標記,繪制出遺傳總距離為2.4cM的精細分子標記連鎖圖,標記S2853-2527和S2853
4、-2843緊鄰M基因兩側,遺傳距離分別是0.2cM和0.7cM,M基因位于家蠶基因組nscaf2853:2,527,929~2,843,864之間,其間有4個預測基因,都屬于序列特異的DNA結合轉錄因子,推測眠性主基因的作用方式可能與此有關。
(3)候選基因3’RACE
在M基因的精細定位的基礎上,結合家蠶全基因組數據庫,根據候選基因的預測CDS區(qū)序列設計特異性引物,利用RACE技術快速擴增獲得定位區(qū)間4個候選基因的
5、cDNA3’端序列。
針對BGIBMGA006391-TA基因進行3’RACE,在p50品系中得到1個序列(p50_6391),在C3白品系中得到2個序列(C3白_6391-1,C3白_6391-2)。C3白_6391-1是BGIBMGA006391-TA的正確產物,具有完整的3’端。C3白_6391-2序列可能是BGIBMGA006392-TA的產物,具有完整的3’端。
針對BGIBMGA006393-TA基因進行
6、3’RACE,在p50品系中得到1個序列(p50_6393),具有完整的3’端,長度為1038bp。
針對BGIBMGA006394-TA基因進行3’RACE,在p50品系中得到2個克隆產物(p50_6394-1,p50_6394-2),在C3白品系中得到1個克隆產物(C3白_6394)。p50_6394-1是BGIBMGA006394-TA的正確產物。p50_6394-2基因序列經BC1M回交定位群體HRM分型驗證確認該序列
7、不屬于第6連鎖群。C3白_6394不是BGIBMGA006394-TA,是距離BGIBMGA006394-TA基因約80K的位置上存在的另外1個共有保守序列的同源基因。
(4)候選基因的表達分析
本研究根據候選基因3’RACE的結果,采用熒光定量RT-PCR技術,對四眠品系p50和三眠品系C3白兩個品系中5個不同基因在幼蟲期不同發(fā)育時期的表達量進行了檢測分析。
從各個基因的表達譜的變化與就眠蛻皮、p50與C
8、3白品系間眠性差異的關聯性分析,p50_6391、C3白_6391-1、C3白_6391-2的表達量的變化動態(tài)與幼蟲期的就眠蛻皮及眠性均未能發(fā)現有關聯性,可以認為預測基因BGIBMGA0006391-TA與眠性性狀無關。
p50_6393基因的表達模式在三眠蠶的1齡與四眠蠶的1-2齡相似,三眠蠶的2-3齡與四眠蠶的3-4齡相似。四眠蠶品種3-4齡的高表達、三眠蠶品種2-3齡的高表達與終齡的決定似乎有一定的關聯。
C3
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 家蠶Nd裸蛹基因的精細定位及候選基因分析.pdf
- MRX84致病基因的精細定位及候選基因分析.pdf
- 家蠶雛翅突變基因(mw)的定位與候選基因分析.pdf
- 芝麻隱性核不育基因(ms)的精細定位及候選基因分析.pdf
- 水稻直立穗基因的精細定位和候選基因的分析.pdf
- 西葫蘆白粉病抗病基因精細定位及候選基因分析.pdf
- 黃瓜性別決定基因M的精細定位及轉錄表達譜分析.pdf
- 水稻光葉性狀基因gl1的精細定位及候選基因分析.pdf
- 控制桃節(jié)間長度Tssd基因的精細定位與候選基因分析.pdf
- 菜豆普通細菌性疫病抗性基因精細定位與候選基因分析.pdf
- 家蠶姬過剩肢(E)的定位克隆與候選基因的表達及進化分析.pdf
- 玉米株高主效qtlqph3.05精細定位及候選基因預測
- 水稻米香基因的精細定位與候選基因的分離.pdf
- Smith-Fineman-Myers綜合征致病基因的精細定位及候選基因分析.pdf
- 一個水稻粒重基因的精細定位和候選基因分析.pdf
- 單基因遺傳病的致病基因定位及候選基因分析.pdf
- 水稻細菌性條斑病抗性QTL qBlsr5a的精細定位及候選基因的表達分析.pdf
- 番茄果實全果肉性狀的精細定位與候選基因分析.pdf
- 水稻多蘗矮稈基因htd(t)和茸毛基因HL1的精細定位及候選基因分析.pdf
- 一個控制水稻分蘗角度主效QTL TAC8的精細定位及候選基因分析.pdf
評論
0/150
提交評論