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文檔簡介
1、在哺乳動物轉(zhuǎn)基因研究中，乳腺生物反應(yīng)器因其具有產(chǎn)量高、易收集、表達產(chǎn)物不進入動物體循環(huán)系統(tǒng)等優(yōu)點，被用于制備蛋白的研究，部分乳腺生物反應(yīng)器已經(jīng)進入商業(yè)化生產(chǎn)階段。如何進一步提高乳腺生物反應(yīng)器的表達效率和表達產(chǎn)物活性成為了人們研究的重點。
本實驗選用具有新霉素抗性基因neorr表達框架的Plasmid GFP-PGK-Neor質(zhì)粒為骨架，構(gòu)建了14kb的乳腺組織特異性表達人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)的同源打靶載體。通過PCR方法分別擴
2、增奶山羊β-酪蛋白基因5'同源臂，人凝血因子Ⅸ基因，bGH PolyA序列，奶山羊β-酪蛋白基因3'及3'同源臂，并順序定向克隆于真核表達質(zhì)粒Plasmid GFP-PGK-Neor的多克隆位點。成功構(gòu)建以奶山羊β-酪蛋白基因上下游為同源臂，由奶山羊β-casein基因5'端上游序列調(diào)控hFⅨ基因轉(zhuǎn)錄，bGH polyA序列為轉(zhuǎn)錄終止信號的組織特異性表達載體。經(jīng)限制性酶切片段分析及DNA序列測序驗證，結(jié)果表明，所構(gòu)建載體結(jié)構(gòu)正確。
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