19809.蛋氨酸裂解酶的真核表達及其應(yīng)用

1、H糞；——自級：—壘L編號：蛋氨酸裂解酶的真核表達及其應(yīng)用TheEukaryotieExpressionandApplicationofMethionineTLayse學(xué)位授予單位及代碼：量壹堡王盔堂!!Q!豎2學(xué)科專業(yè)名稱及代碼：生塑醫(yī)堂王程IQ921盟2研亢萬同：生物撾抖申請學(xué)位級別：亟指導(dǎo)教帥：士煎堡研究生：型l熊論文起止時間：2Q!Q』=墊!!：!!摘要蛋氮酸裂解酶為多功能酶，能夠催化L蛋氪酸、L一半胱氨酸以及同型半胱氨酸等多種

2、物質(zhì)?？蓮V泛應(yīng)用于癌癥的輔助治療以及心血管疾病的輔助診斷，本文成功構(gòu)建畢赤酵母表達系統(tǒng)，獲得蛋氮酸裂解酶純品并對其相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)和在檢測試劑盒的應(yīng)用方面行了探索。以人隅道毛滴蟲mRNA為模板克隆出蛋氨酸裂解酶基因，構(gòu)建畢赤酵母表達載體pPIC9Kmgll，測序正確后轉(zhuǎn)化到GSll5中篩選得到高拷貝重組菌株。誘導(dǎo)表達重組蛋白，優(yōu)化表達條件得到最佳口H值為60，最佳誘導(dǎo)溫度為28℃，最佳甲醇添加量為O5％。純化后蛋白純度大干85％，純化回收率

3、大干528％，每升發(fā)酵液可以獲得6042mg重組蛋白。酶對L一蛋氨酸、L半胱氨酸、同型半胱氨酸為底物的比活力為077umol／mirdmg，083476um01／min／mg，119863“mol／mirdmg：Kin值分別為0432mM，198mM，236mM。最適酶活性條件為35℃至37℃，pH值為60至70。利用酶活性檢測原理，組裝同型半胱氨酸檢測試劑盒，試檢測結(jié)果與商品化試劑盒檢測結(jié)果無定性上的差異，為同型半眥氨酸檢測試劑盒國產(chǎn)