抗B7分子單克隆抗體與免疫抑制劑聯(lián)用對感染人巨細胞病毒的T淋巴細胞增殖影響及機理初探.pdf

1、移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)是由供者細胞識別宿主細胞表面抗原引起免疫反應,導致受者多臟器損傷,是同種異基因造血干細胞移植后的主要并發(fā)癥<'[1]>.如何改善或克服現(xiàn)用免疫抑制劑或方法存在的弊端,抑或創(chuàng)造出新一代理想、高效、低毒、能防治或減弱GVHD的新策略或措施,已成為迫切需要解決的問題.成熟T淋巴細胞在GVHD的發(fā)生與發(fā)展中起著核心作用,T淋巴細胞的激活不僅需要抗原特異性信號刺激,同時

2、需要共刺激信號瞳<'[2]>.CD28/B7就是一種主要的共刺激信號系統(tǒng).B7分子家族有二個重要的成員:B7-1和B7-2,屬于免疫球蛋白超家族.B7-1和B7-2的共同配體為T淋巴細胞表面的CD28以及僅存在于活化T淋巴細胞表面的CTLA-4.當B7與CD28結(jié)合時,可產(chǎn)生第二活化信號.當?shù)谝换罨盘柎嬖跁r,使相應CD4<'+>細胞和CD8<'+>細胞克隆活化、增殖,并增加細胞表面多種粘附分子的表達,加強細胞間的相互作用,同時促進細胞

3、內(nèi)多種細胞因子基因表達,從而促進免疫反應的發(fā)生和發(fā)展.先期研究已證實,阻斷抗原遞呈細胞表面B7分子與T淋巴細胞表面CD28分子相互作用,即阻斷T淋巴細胞活化的必需的信號傳導途徑,可以誘導T淋巴細胞產(chǎn)生耐受<'[3]>.盡管B7-1和B7-2的結(jié)構(gòu)很相似,但仍顯示出不同的生化特性及作用<'[4]>.目前,對B7-1和B7-2分子的研究較多,但有關(guān)B7-1和B7-2作用差異的研究卻不多.重度GVHD可能與Th1亞群和Th2亞群所分泌的細胞因

4、子失去平衡有關(guān).移植物所含有CD4<'+>輔助性細胞(Th)識別宿主所表達的異源性主要和次要組織兼容性抗原而激活,進而分泌可溶性細胞因子促進宿主抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活性和遲發(fā)性超敏反應.CD4<'+>Th細胞克隆按其分泌細胞因子譜的不同,分為Th1和Th2兩種亞群.Th1亞群產(chǎn)生IL-2,INF-γ,LT,IL-3和GM-CSF,可促進CTL細胞活性、DTH反應.Th1亞群促進細胞免疫反應,是引發(fā)GVHD的主要細胞亞群

5、.Th2亞群主要產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等細胞因子,促進體液免疫反應、免疫耐受以及粘膜免疫反應等<['2]>.基于以上事實,Th1和Th2亞群及其所分泌細胞因子在GVHD的發(fā)生與發(fā)展中的相互作用和關(guān)系的研究受到廣泛關(guān)注.混合淋巴細胞反應(mixed lymptIOCyte reaction,MLR)是研究GVFlD中移植物對機體抗原識別反應的一種重要體外模式.在該反應體系中,淋巴細胞的增殖及某些細胞因子的釋放在某種程

6、度上代表了在體時的移植物抗宿主反應<['2]>. 霉酚酸酯(Mycophenolate Mofetil,MMF)、環(huán)孢素A(Cyclosporine A,CsA)等是近年來防治GVHD的免疫抑制劑.霉酚酸酯是體內(nèi)活性物質(zhì)霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)的酯類前體,MPA對淋巴細胞的嘌呤合成具有選擇性抑制作用<['5,6]>.環(huán)孢素A是從真菌分離出來的一種脂溶性環(huán)狀十一肽,可選擇性作用于T細胞,抑制其活化<['

7、7,8]>.人巨細胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)屬于β皰疹病毒家族成員之一,是一機會性致病原體,能長期潛伏在免疫功能完備的宿主體內(nèi),在人群中的感染率為70-100﹪.近年來,隨著造血干細胞移植臨床應用日漸廣泛,由HCMV引發(fā)的嚴重并發(fā)癥逐漸增加,嚴重的GVHD是HCMV感染的高危因素之一陽<['9]>. 有研究表明,抗B7-1單抗聯(lián)合環(huán)孢素A可誘導T淋巴細胞耐受<['10]>.霉酚酸酯加短程氨甲

8、蝶呤成功地預防異基因骨髓移植時發(fā)生的GVHD<['11]>.但是,B7-1、B7-2單抗對共刺激途徑是否有不同的作用地位?對細胞因子表達的影響,能否抑制T淋巴細胞的增殖及活化?與環(huán)孢菌素A、霉酚酸酯是否有協(xié)同作用,以及人巨細胞病毒感染時對此作用的影響,尚未見文獻報道.本研究擬在體外建立同種異基因T淋巴細胞反應系統(tǒng),分別觀察抗B7-1、B7-2分子的單抗以及兩種抗體聯(lián)用對T淋巴細胞的細胞增殖及效應的影響,尤其是聯(lián)用MPA或CsA時,以及人

9、巨細胞病毒(HCMV)感染對此作用的影響,冀能為其臨床應用提供較深入的理論基礎(chǔ). 本實驗研究共分四部分: (一)、B7分子單抗對外周血T淋巴細胞功能及細胞因子表達的影響. (二)、B7分子單抗聯(lián)用霉酚酸影響T淋巴細胞增殖及細胞因子表達. (三)、B7分子單抗聯(lián)用環(huán)孢素A對T淋巴細胞增殖及細胞因子表達的影響. (四)、初步探討HCMV感染細胞對B7單抗及免疫抑制劑作用的變化. 結(jié)論如下:

10、 1、在體外,單獨應用抗B7-1或抗B7-2單抗以及兩者聯(lián)合均能抑制T淋巴細胞增殖,使T細胞處于免疫耐受狀態(tài).單獨應用抗B7-1或抗B7-2單抗可以部分阻斷T細胞反應,抗B7-2單抗的阻斷作用更強.聯(lián)合應用兩種單抗則可加強阻斷T細胞在單向MLR中的增殖反應.此外,B7-1、B7-2單抗對細胞因子基因表達的影響有所不同. 2、一定劑量MPA或CsA均能明顯地抑制T淋巴細胞增殖,可能與其抑制IL-2、INF-γ表達,增強IL-1

11、0表達有關(guān),即能改變細胞因子表達譜,促使Th1亞群向Th2 亞群偏移可能是其發(fā)揮免疫負調(diào)節(jié)作用的機制之一;聯(lián)用抗B7-1單抗有一定協(xié)同效應. 3、在HCMV感染(滴度為50 TCID<,50>)后,混合淋巴細胞培養(yǎng)的T淋巴細胞增殖反應明顯地下降;INF-γ的表達量在感染了HCMV后均有明顯增加. 4、MPA降低了感染HCMV混合淋巴細胞培養(yǎng)體系的INF-γ蛋白的表達,抗B7-2單抗與其聯(lián)用,則進一步降低INF-γ的表達.