人巨細胞病毒糖蛋白B單克隆抗體制備、鑒定及初步應用.pdf

1、研究背景:人巨細胞病毒(HCMV)在人群中普遍感染，對于免疫系統(tǒng)發(fā)育不全和免疫抑制患者可引起嚴重并發(fā)癥.包膜糖蛋白B(gB)是參與感染過程的關鍵蛋白，與病毒粘附、穿入宿主細胞及細胞間融合、傳播密切相關；是HCMV中和抗體的主要靶蛋白，亦是疫苗研究的主要候選蛋白。研究HCMV-gB及其抗體對闡明HCMV致病機制及疫苗的研制有重要價值。本課題通過篩選和合成gB中具優(yōu)勢免疫原性的氨基酸短序列，并制備單克隆抗體，為HCMV-gB功能學研究，闡明

2、HCMV致病機制和疫苗的研制打下基礎。
　　 實驗目的:設計含優(yōu)勢免疫原性表位的HCMVgB多肽片段；獲得特異的gB單克隆抗體；將單克隆抗體初步應用于gB抗原檢測。
　　 實驗方法:以GenBank公布的Towne株、AD169株序列為基礎，篩選并合成兩條gB多肽(STRGTSATHSHHSS和SHATSSTHNGSHTS)；免疫Balb/c小鼠，應用雜交瘤融合技術制備出gB單克隆抗體；采用ELISA、免疫細胞化學染色法

3、、免疫印跡、免疫沉淀等方法鑒定抗體性質。將制備的單克隆抗體應用于外周血白細胞樣本的gB抗原檢測。
　　 實驗結果:制備得到單克隆抗體ZJU-FH6STRGTSATHSHHSS和ZJU-FE6SHATSSTHNGSHTS，分別為IgG1-κ和IgG2a-κ抗體亞型。經間接ELISA法鑒定，ZJU-FH6效價為1:60000(初始濃度4mg/mL)；ZJU-FE6效價為1:240000(初始濃度1.2mg/mL)。免疫印跡和免疫沉淀

4、顯示ZJU-FH6和ZJU-FE6，均可識別變性的和天然的HCMVgB抗原。HCMV感染MRC-5的免疫細胞化學染色鑒定，ZJU-FH6和ZJU-FE6可檢測Towne株和AD169株感染細胞的gB抗原。以制備的單克隆抗體檢測Allo-HSCT受者PBLs中的gB抗原，陽性率分別為79.1％和84.6％，平均陽性細胞數分別為6.20/5×104WBC和6.88/5×104WBC，均無明顯的統(tǒng)計學差異(P>0.05)。單克隆抗體ZJU-F