ZHC116對腎間質(zhì)纖維化療效及作用機(jī)制初步研究.pdf

1、第一章ZHC116抗UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化的療效觀察
　　研究背景：腎間質(zhì)纖維化(Renal interstitial fibrosis，RIF)是指由多種原因引起的細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)在腎間質(zhì)的過度沉積，是多種慢性腎臟病(Chronic Kidney Disease，CKD)進(jìn)展至終末期腎病(End-stage renal disease，ESRD)的病理基礎(chǔ)和共同通路。探討腎間質(zhì)纖維化

2、的發(fā)生機(jī)制、研發(fā)抗腎間質(zhì)纖維化的藥物對慢性腎臟疾病的控制具有重要意義。ZHC-116是本課題組設(shè)計(jì)的新一代抗纖維化新藥。前期體外研究表明，ZHC116具有抗腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(Epithelial mesenchymal transition，EMT)的作用，具有抗纖維化的潛能。
　　目的：觀察ZHC116對單側(cè)輸尿管結(jié)扎(Unilateral UreteralObstruction，UUO)大鼠腎間質(zhì)纖維化動(dòng)物模型間質(zhì)損傷、纖

3、維化、Ⅲ型膠原表達(dá)的影響。
　　方法：建立UUO腎間質(zhì)纖維化模型。SD大鼠（20只，每組5只）隨機(jī)分為假手術(shù)組、UUO模型14天組、ZHC116(100mg/d)治療組、吡非尼酮(500mg/d)治療組;于UUO術(shù)后14天留取各組大鼠梗阻側(cè)腎臟標(biāo)本，用HE和Masson染色方法觀察大鼠腎間質(zhì)纖維化成模情況及藥物療效，免疫組化方法觀察Ⅲ型膠原表達(dá)。
　　結(jié)果：UUO術(shù)后14天，模型組大鼠梗阻側(cè)腎臟腎間質(zhì)損傷指數(shù)、Masson染

4、色評分以及Ⅲ型膠原表達(dá)比假手術(shù)組顯著升高(p＜0.05);與模型組相比，ZHC116和吡非尼酮治療均能顯著降低UUO大鼠梗阻側(cè)腎間質(zhì)損傷評分、Masson染色評分和Ⅲ型膠原的表達(dá)(p＜0.05);與吡非尼酮治療組相比，ZHC116治療組腎間質(zhì)Ⅲ型膠原陽性表達(dá)面積百分比顯著減少(p＜0.05)。
　　結(jié)論：ZHC116具有抗腎間質(zhì)纖維化的作用，100mg/kg ZHC116療效優(yōu)于500mg/kg吡非尼酮。
　　第二章ZHC1

5、16對AngⅡ刺激腎小管上皮細(xì)胞MAPK通路的影響
　　研究背景：腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）的激活，尤其是血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ)的產(chǎn)生是腎間質(zhì)纖維化和慢性腎臟病進(jìn)展的重要介質(zhì)。絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedprotein kinase，MAPK)是參與多種細(xì)胞過程如分化、增殖、炎癥、纖維化的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。AngⅡ可以誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞MAPK通路的活化，參與腎間質(zhì)纖維化中

6、的炎癥、氧化應(yīng)激、細(xì)胞增殖、致纖維化因子產(chǎn)生等發(fā)病機(jī)制。初步研究顯示ZHC116具有抗腎間質(zhì)纖維化的療效，本部分將初步探討ZHC116抗腎間質(zhì)纖維化的作用機(jī)制。
　　目的：觀察ZHC116對AngⅡ刺激大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E) MAPK通路中細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(Extracellular signal-regulated protein kinase1/2，ERK1/2)通路的影響。
　　方法：培養(yǎng)NRK-

7、52E細(xì)胞，設(shè)立正常對照組、AngⅡ刺激模型組、AngⅡ+ZHC116治療組、AngⅡ+p-ERK抑制劑組。模型組予以AngⅡ(10-7M)刺激15min;ZHC116治療組予以ZHC116（50ug/ml）預(yù)處理24小時(shí)，并用AngⅡ(10-7M)刺激15min;抑制劑組p-ERK抑制劑（PD98059，10μM）處理1h，并用AngⅡ(10-7M)刺激15min。同時(shí)收集各組細(xì)胞總蛋白，Westem Blot方法檢測p-ERK、ER