基于上皮間質轉化現(xiàn)象對益氣活血方抗大鼠肝纖維化療效及分子機制的研究.pdf

1、背景:肝纖維化（Hepatic fibrosis，HF）是指肝臟中細胞外基質(Extraeellularmatrix，ECM)尤其是膠原的過量沉積。它不是一個獨立的疾病，而是各種病因所致的慢性肝病的共同病理過程，是發(fā)展到肝硬化必經(jīng)階段，并與肝癌有關。因此抗纖維化治療對肝硬化及肝癌的防治、延緩疾病進程、減少患者痛苦及疾病支出具有重要臨床意義。近年來的研究表明:肝星狀細胞活化、肝竇毛細血管化、上皮間質轉化均參與了肝纖維化的進程，其中對上皮間

2、質轉化參與肝纖維化的研究相對較少，所以進一步研究影響上皮間質轉化這一病理生理現(xiàn)象的調控因素，可為肝纖維化的治療提供新的途徑。目前西醫(yī)尚無特別有效的抗肝纖維化藥物，而中醫(yī)藥在防治肝纖維化方面進行了大量的實驗和臨床研究，顯示出較好的療效和優(yōu)勢。益氣活血方（黃芪、莪術、九香蟲、桃仁）是孫桂芝教授在總結多年臨床經(jīng)驗的基礎上提煉出來的治療肝纖維化肝硬化的小驗方。經(jīng)本人導師呂文良主任和廣安門醫(yī)院肝炎門診的其他專家大量臨床觀察驗證，益氣活血方的確有顯

3、著的抗肝纖維化療效。
　　 目的:通過觀察益氣活血方對大鼠肝纖維化的影響，研究其抗肝纖維化的療效;驗證肝纖維化進程中存在上皮間質轉化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)現(xiàn)象且轉化生長因子-β（Transforming growth factor-β，TGF-β）/轉化生長因子-βⅡ型受體（Transforming growth factor-β receptorⅡ，TGFβRⅡ）/Sma

4、ds信號通路參與了EMT，為EMT參與HF提供實驗室依據(jù);探討益氣活血方抗肝纖維化的分子機制，以便更好的運用于臨床，也為挖掘傳承名老中醫(yī)經(jīng)驗的科學內涵提供新的研究思路。
　　 方法:采用四氯化碳和乙醇復合因素復制大鼠肝纖維化模型，從第5周起，造模的同時開始給予藥物干預，藥物干預12周后采取大鼠血清、肝臟、脾臟。檢測大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶（Alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（Aspar

5、tate aminotransferase，AST）、白蛋白(Albumin，ALB)含量。記錄肝臟、脾臟重量并計算肝指數(shù)、脾指數(shù)。取各組大鼠肝臟的相同部位進行病理切片HE染色，光鏡下觀察各組大鼠病理結果，并進行纖維化分級。免疫組化法檢測肝組織中E-鈣粘素(Epithelial Ca2+dependent cell adhesion molecules，E-cadherin)、TGF-β1、TGFβ RⅡ、Smad2，并應用Axio V

6、ision Release4.8.2圖像分析軟件測量各指標的陽性表達面積總值和陽性面積百分比。
　　 結果:經(jīng)四氯化碳和乙醇造模后，模型組大鼠的肝濕重、脾濕重、肝指數(shù)、脾指數(shù)均升高，與空白對照組的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);給予益氣活血方治療后大鼠的肝濕重、脾濕重、肝指數(shù)、脾指數(shù)下降，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。模型組ALT、AST升高，ALB降低，與空白對照組的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);給予益氣

7、活血方治療后大鼠的ALT、AST水平降低，ALB升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。HE染色結果顯示，空白對照組大鼠肝臟纖維化程度全部處于S0期，模型組主要集中在S4期，二者的差異有顯著的統(tǒng)計學意義(P＜0.01);益氣活血組主要分布在S1-S3期，與模型組的差異有顯著的統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。免疫組化結果顯示，模型組大鼠肝組織中E-cadherin表達下調，TGF-β1、TGFβ RⅡ、Smad2的表達上調，與空白

8、對照組的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);益氣活血組E-cadherin表達較模型組提高，TGF-β1、TGFβRⅡ、Smad2的表達較模型組降低，二者的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論:益氣活血方能降低肝纖維化大鼠肝濕重、脾濕重、肝指數(shù)、脾指數(shù)，并能降低ALT、AST，提高ALB水平，從而改善肝纖維化大鼠肝脾形態(tài)及肝功能。從病理上來看，益氣活血方能改善肝臟炎癥程度，減少細胞外基質的沉積，促使肝纖維化逆轉，具有很好

9、的抗肝纖維化療效。上皮間質轉化參與了大鼠肝纖維化的發(fā)展進程，模型組E-cadherin表達的下降是其參與纖維化的證據(jù)。益氣活血方能上調E-cadherin的表達，提示其可以逆轉EMT，從而逆轉肝纖維化。益氣活血方能通過下調TGF-β1、TGFβ RⅡ、Smad2的表達阻斷TGF-β/TGFβ RⅡ/Smads通路，從而阻斷肝纖維化進程。鑒于TGF-β/TGFβRⅡ/Smads通路是EMT的主要通路之一，而我們的研究發(fā)現(xiàn)益氣活血方既可以逆