西多福韋對(duì)人乳頭瘤病毒感染的宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的研究.pdf

1、目的：研究我國(guó)宮頸癌(cervical carcinoma，CC)及癌前病變中人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染的現(xiàn)狀及其型別特征；探討西多福韋(Cidofovir，CDV)對(duì)HPV感染的宮頸癌Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞增殖生長(zhǎng)的抑制作用，以評(píng)價(jià)西多福韋抗HPV感染和抗腫瘤的應(yīng)用價(jià)值。 方法： 1．臨床研究：①回顧性分析690例患者的HPV檢測(cè)、宮頸細(xì)胞學(xué)及陰道鏡下宮頸組織病理學(xué)檢查結(jié)果

2、。其中，細(xì)胞學(xué)檢查應(yīng)用TCT法(Thinprepcytology test)，高危型HPV檢測(cè)應(yīng)用第二代雜交捕獲實(shí)驗(yàn)(Hybrid CaptureⅡ，HCⅡ)。②回顧性分析153例宮頸癌及癌前病變的石蠟包埋組織標(biāo)本，提取組織中DNA，應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)HPV亞型。 2．體外研究：①應(yīng)用MTT比色法和集落形成試驗(yàn)，測(cè)定西多福韋作用前后Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞的活性；⑦應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR法，觀察西多福韋對(duì)Hela細(xì)胞中HPV18

3、 E6、E7 mRNA和Siha細(xì)胞中HPV16 E6、E7 mRNA表達(dá)的影響：③應(yīng)用Western-blot法，觀察西多福韋用藥前后Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞中p53、Rb等抑癌基因的表達(dá)；④應(yīng)用流式細(xì)胞儀，檢測(cè)西多福韋對(duì)Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞的細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響；⑤應(yīng)用TRAP-ELISA法，檢測(cè)西多福韋用藥前后Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞端粒酶的活性。 3．體內(nèi)研究：應(yīng)用Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞分別建立裸鼠人宮

4、頸癌模型(2×106個(gè)細(xì)胞/只)。腫瘤形成后，隨機(jī)將裸鼠各分為3組，分別在瘤內(nèi)注射PBS、2.5mg/ml西多福韋(0.25mg/次)和5.0mg/ml西多福韋(0.5mg/次)，3次/周，共3周。①通過(guò)比較腫瘤體積和重量，觀察西多福韋對(duì)裸鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用；②應(yīng)用Western-blot法，觀察西多福韋用藥前后腫瘤中p53蛋白的表達(dá)；③應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組腫瘤切片中PCNA抗原的表達(dá)，同時(shí)應(yīng)用TUNEL技術(shù)檢測(cè)西多福韋對(duì)細(xì)胞凋

5、亡的影響。 結(jié)果： 1．臨床研究：①宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia．CIN)Ⅱ/Ⅲ和浸潤(rùn)癌患者的高危型HPV陽(yáng)性率均在90.00％以上，且細(xì)胞學(xué)、病理學(xué)級(jí)別越高，高危型HPV感染率越高；②HPV負(fù)荷量越高，宮頸病變程度越嚴(yán)重；③宮頸病變程度不同，其感染的HPV亞型亦有所不同，其中HPV16是主要的致病亞型；④HPV混合感染率隨著宮頸病變病理學(xué)級(jí)別的增高而增加。

6、 2．體外研究：①M(fèi)TT比色法和集落形成試驗(yàn)結(jié)果顯示，西多福韋能明顯抑制Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞的增殖活性，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)；②實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果證實(shí)，西多福韋能明顯降低Hela細(xì)胞中HPV18 E6、E7和Siha細(xì)胞中HPV16 E6、E7 mRNA的表達(dá)；③西多福韋可使Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞中p53蛋白的表達(dá)增高，且具有劑量依賴關(guān)系，還可使細(xì)胞中非磷酸化Rb蛋白產(chǎn)物增加，磷酸化Rb蛋白產(chǎn)物降低；④

7、西多福韋能使Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞阻滯于細(xì)胞周期的S期和G1期；⑤與對(duì)照組比較，西多福韋能明顯抑制Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞的端粒酶活性(P＜0.01)。 3．體內(nèi)研究：①西多福韋能明顯抑制接種了Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞的裸鼠腫瘤的體積和重量，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.01)；②Western-blot結(jié)果顯示，西多福韋能增加裸鼠腫瘤中p53蛋白的表達(dá)；③西多福韋還可使腫瘤中PCNA的表達(dá)降低，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。